进出口行业标准-出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)——7

6.14 氰化钾培养基(KCN)
6.14.1制备 　　
蛋白胨　　　　　　　10.0g 　　
氯化钠　　　　      5.0g 　　
磷酸二氢钾　　　 　 0.225g 
磷酸氢二钠　　　　　5.64g　　
硝酸钾(无亚硝酸盐)　1.0g 　　
5g/L氰化钾溶液　　  10.0mL 　　
蒸馏水              1000.0mL 　　
将蛋白胨、氯化钠和硝酸钾加入 900mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.6±0.1,高压灭菌121℃,15min,取出置于4℃冰箱内进行冷却。　　
将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠溶于100 mL蒸馏水,高压灭菌121℃,15min,取出进行冷却。　　
在冷却后的上述培养液900mL中,以无菌操作加入磷酸盐缓冲液100mL和5g/L氰化钾溶液(必须用冷却的灭菌蒸馏水配制)10mL,摇混均匀(氰化钾的最终浓度为0.05 g/L)。并立即分装灭菌试管(12 mm×100mm),每管约1～1.5mL,同时加入约0.3mL灭菌石蜡油封盖。在4℃冰箱中可保存7d。　　　　 
6.14.2　试验与判断 
6.14.2.1制试剂　　
甲液：　　
氨基苯磺酸　 0.8g 　　
5 mol/L乙酸 100.0mL 　　
乙液：　　
α-萘胺　     0.5g 　　
5 mol/L乙酸 100.0mL 
6.14.2.2试验 　　
在三糖铁琼脂斜面上挑取少量菌苔,先接种于吲哚培养基中,混匀(使其浓度近似于 37℃,24h肉汤培养物)然后烧灼接种环,再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中, 于37℃培养24±2h。培养之后,先观察培养液有无混浊,然后在每支氰化钾培养物试管内滴加甲液1滴,然后再滴加乙液1滴,摇匀。 
6.14.2.3判断　　
强阳性反应为鲜红色,弱阳性为粉红色,在30～60 min内,强阳性可转为暗褐色。阴性无变化(加试剂前,培养液出现混浊,即有细菌生长,亦为阳性反应)。
6.15 丙二酸钠培养基(M) 　　
酵母膏　　　 1.0g 　　
硫酸铵　　　 2.0g 　　
磷酸氢二钾　 0.6g 　　
磷酸二氢钾　 0.4g 　　
氯化钠　　   2.0g 　　
丙二酸钠　　 3.0g 　　
葡萄糖　　　 0.25g 　　
溴麝香草酚蓝 0.025g或5g/L溶液5 mL 　　
蒸馏水       1000.0mL 　　
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH6.9±0.1,加入溴麝香草酚蓝,再混匀,分装试管(12mm×100mm), 每管1～1.5mL,高压灭菌115℃,10min。　　
试验与判断：
接种大量幼嫩待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为普蓝色；阴性不变色。 
6.16 卫矛醇半固体琼脂(D) 　　
蛋白胨　　　　2.0g 
酵母膏        1.0g 　　
卫矛醇　 　　 10.0g 　　
氯化钠　　　　5.0g 　　
磷酸氢二钾　　0.3g 　　
溴麝香草酚篮　0.08g或8g/L溶液10mL 　　
琼　脂        2.5g 　　
蒸馏水　　　  1000.0mL 　　
除溴麝香草酚蓝外,将其他成分加入蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10 min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.1±0.1,加入溴麝香草酚篮,呈绿色,分装试管(12mm×100mm),  in,灭菌后立即取出,冷却备用。　　
试验与判断：
穿刺接种待试菌,于37℃培养24±2h,阳性反应为黄色阴性不变色。　　
注：新制备的培养基均应用已知阳性及阴性菌进行测试,以保证培养基质量。每管约1～1.5mL,高压灭菌121℃,15m 
   
   

 

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