4鉴定
4.1筛选试验
4.1.1每个琼脂平板至少应挑选2个典型或可疑菌落,分别用接种针接种赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶琼脂一管,接种后无须灭菌接种针,直接再接种三糖铁琼脂一管于37℃培养24±2h。
4.1.2 挑取菌落后的琼脂平板,应置于4～8℃至少保留24 h,以备必要时复查。
4.1.3 按表2或表3结果进行判断。
表2 三糖铁琼脂和赖氨酸脱羟酶培养基筛选
三 糖 铁 琼 脂 赖氨酸脱羧酶培养基 初步判断
斜 面 底 层 产 气 硫化氢
K A ＋(－) ＋(－) + 可疑沙门氏菌属
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) + 可疑沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) - 非沙门氏菌属
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙门氏菌属
注: K—产碱; ＋—阳性反应; (－)—少见反应；A—产酸; －—阴性反应; ＋/－─阳性或阴性反应。
表3 三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选
三 糖 铁 琼 脂 尿素酶琼脂 初步判断
斜 面 底 层 产 气 硫化氢
K A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) - 可疑沙门氏菌属
K A ＋(－) ＋(－) + 非沙门氏菌属
A A ＋(－) ＋(－) + 非沙门氏菌属
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－ 非沙门氏菌属
注: K—产碱; ＋—阳性反应; (－)—少见反应；A—产酸; －—阴性反应; ＋/－─阳性或阴性反应。
4.2 生化试验
4.2.1 将符合表2或表3可疑沙门氏菌属特性的三糖铁琼脂培养物,按表4进行生化试验 (表中赖氨酸脱羧酶试验或尿素酶试验的结果见4.1结果,不再另做)。
表4 沙门氏菌属生化反应
序 号 生 化 项 目 反 应
沙门氏菌 亚利桑那菌
1 尿素酶试验 - -
2 V-P试验 - -
3 氰化钾试验 - -
4 赖氨酸脱羧酶试验 + +
5 吲哚试验 - -
6 丙二酸钠试验 - +
7 卫矛醇试验 d -
注: ＋—阳性反应；－—阴性反应；d—反应不定。
4.2.2 所有生化试验管均于37℃培养24±2 h。
4.2.3 生化试验结果符合表4沙门氏菌属特性的按4.3进行。
4.3 血清学试验
4.3.1 检查培养物有无自凝性
在洁净的玻片上加一滴生理盐水,将待试培养物混合于生理盐水滴内,使成为均一性的混浊悬液,将玻片轻轻摇动30～60 s,在黑色背景下观察反应(最好用放大镜观察)。如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物,即认为有自凝性。反之无自凝性。
4.3.2 检查“O”抗原
对无自凝性的培养物,按照4.3.1的程序进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水, 在2min内判断结果。如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验。如为阴性结果,必要时,可结合4.2结果按4.3.3进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验。
4.3.3 检查“Vi”抗原
按照4.3.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。
4.4 根据4.2和4.3试验结果,按照表5进行判定。
表5 沙门氏菌属生化试验与血清学试验结果判定
类别 生化试验 血清学试验 其他试验 判定
1 符合表4中沙门氏菌生化特性 "O"因子血清分群阳性 沙门氏菌
2 符合表4中沙门氏菌生化特性 "O"因子血清分群阴性 菌落典型,
镜检革蓝氏 沙门氏菌
阴性无芽胞杆菌
3 尿素酶试验阳性 非沙门氏菌
4 尿素酶试验阴性,表4生化反应 "O"因子血清分群阳性 沙门氏菌
3～5项中任一项不符合沙门氏菌
5 尿素酶试验阴性,表4生化反应
2～5项中任一项不符合沙门氏菌 "O"因子血清分群阴性 非沙门氏菌
6 尿素酶试验阴性,表4生化反应
2～5项中任二项或二项以上不符沙门氏菌 非沙门氏菌
7 符合表4中亚利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群阳性 亚利桑那菌
8符合表4中亚利桑那菌生化特性 "O"因子血清分群阴性 菌落典型, 亚利桑那菌
镜检革蓝氏
阴性无芽胞杆菌
9 尿素酶试验阳性 非亚利桑那菌
10 尿素酶试验阴性,表4生化反应 "O"因子血清分群阳性 亚利桑那菌
3～5项中任一项不符合亚利桑那菌
11 尿素酶试验阴性,表4生化反应 "O"因子血清分群阴性 非亚利桑那菌
2～5项中任一项不符合亚利桑那菌
12 尿素酶试验阴性,表4生化反应 非亚利桑那菌 2～5项中任二项或二项以上不符亚利桑那菌
注: ①丙二酸钠试验阴性,卫矛醇试验反应不定的菌株,按上述1～6类别结果进行判断。
②丙二酸钠试验阳性,卫矛醇试验阴性的菌株,按上述7～12类别结果进行判断。
③如以上生化项目仍不能判定时,可按P·R·爱德华,W·H·爱文:《肠杆菌科的鉴 定》(1978中译本),扩大必要的生化试验。结合血清学作综合判定。
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