血浆凝固酶实验
实验步骤:
(1)首先取一盒海博生物冻干兔血浆,按瓶盖上箭头方向掀开并撕下铝箔盖
(2)用镊子打开西林瓶胶塞。
(3)用移液枪吸取0.8ml新鲜的BHI肉汤培养物,加入西林瓶中。
“新鲜”即为,培养物从培养箱取出后,立即进行试验。以保证培养物酶活力良好。避免出现因取出一段时间后,因酶活力降低而引起的假阴性。
也可以每支西林瓶中加入0.5ml灭菌生理盐水轻微摇晃至完全溶解,然后加入0.3ml肉汤培养物。
(4)之后塞上胶塞,轻轻摇动瓶身至混合均匀,注意不要采取剧烈摇晃的方式,之后置36℃±1℃培养。
结果观察:
每半小时观察一次,观察6h, 观察时采用将西林瓶缓慢倾斜或倒置的方式,切记不要剧烈摇晃,如凝固为阳性,不凝固则为阴性。
实验原理:
致病性葡萄球菌能产生游离凝固酶,释放于血浆中,被血浆中的凝固酶致活因子激活后变成耐热的凝固酶样物质,此物质使纤维蛋白原变为固态纤维蛋白,血浆因而凝固。
特别提醒:
试验必须每半小时观察一次,不可直接观察6h后的结果。一些金黄色葡萄球菌能够产生蛋白酶来分解纤维蛋白,而出现先凝集而后消融的情况,所以需每半小时观察一次,防止因观察不及时,而误判成假阴性。