博检革兰氏阴性细菌鉴定系统使用说明 青岛海博生物技术有限公司
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本系统通过21种生化测试，配合标准数据库，可对革兰氏阴性细菌的归属进行鉴定。

原理

  不同种属的细菌具有不完全相同的生化特征。本系统选取21种典型生化试验，并把生化反应的结果转换为一个8进制数，通过提供的标准数据库查询系统可得到实验菌株归属的相对概率、T值和R值，对菌株的归属进行一定程度的鉴定。

生化管
  本系统含20种生化管及一个氧化酶试纸条，分别为ONPG、精氨酸（ADH）、赖氨酸（LDH）、鸟氨酸（ODC）、柠檬酸盐利用实验（CIT）、产硫化氢试验（H2S）、脲酶（URE）、乳糖（LAC）、吲哚（IND）、VP、明胶（GEL）、葡萄糖（GLU）、甘露醇（MAN）、肌醇（INO）、山梨醇（SOR）、鼠李糖 （RHA）、蔗糖（SAC）、蜜二糖（MEL）、苦杏仁甙（AMY）、阿拉伯糖（ARA）、氧化酶（OX）。

附品
  1张记录卡
  1份使用说明书

所需试剂及仪器
  仪器：1根接种环、2个100ul无菌枪头、1支100ul移液器、混匀器、酒精灯、冰箱、培养箱、记号笔。
  试剂：1套VP试剂、1支Kovacs氏靛基质试剂 1支液体石蜡 1支0.85%NaCl生理盐水
  建议使用海博公司产品
  其它：1个营养琼脂或胰蛋白胨大豆琼脂平板

存储
  2～8℃，避光保存，并在有效期内使用。
  为保证实验的有效性，实验应在无菌环境下进行

1.准备
  1.1 从2-8℃避光环境中取出试剂盒。
  1.2 开启包装盒，轻轻抖动使培养基落入槽的下部；
  1.3 使用酒精棉将产品表面的锡箔以及盖子上的刺头擦拭杀菌。将盖子上的刺头翻转并在培养基上放的锡箔上扎空。
  1.4 取出在避光纸保藏中的氧化酶试纸条，使用移液器滴加100ul0.85%NaCl溶液于纸条一端，挑取待测菌新鲜菌苔涂抹落于浸湿的纸条上，2分钟内观察并记录结果。
  1.5 使用接种环从预先准备好的营养琼脂或胰蛋白胨大豆琼脂平板上挑取适量菌苔于生理盐水中，在混匀器上当混匀，制备菌悬液。

2.接种
  2.1 使用移液器向每支生化管中加入100ul制备好的菌悬液。
  2.2 柠檬酸盐利用实验（CIT）为固体斜面培养基，菌悬液需沿斜面加入。
  2.3 吸取200ul液体石蜡覆盖ADH、LDH、URE和ODC。
  2.4 35～37℃恒温培养18～24小时。

3.结果判读
  3.1 VP试验：取出试剂盒，向VP管内滴加1滴VP甲液和3滴VP乙液后，置于35～37℃恒温培养箱继续培养30分钟后取出，培养基变为红色表明为阳性反应。
  3.2 IND试验：滴加2～4滴Kovacs氏靛基质试剂,两分钟内出现粉红色环表明为阳性反应。

表1：博检革兰氏阴性菌鉴定系统判读表
培养基 阳性（+） 阴性（-） 培养基 阳性（+） 阴性（-）
ONPG LAC GLU MAN
INO SOR RHA
SAC MEL AMY
ARA

ADH LDH ODC ADH LDH ODC
CIT
H2S VP
URE GEL
IND OX
注：对糖醇类生化反应管而言，若安瓿瓶底部呈黄色上部呈绿色也应判为阳性。

4.编码
  4.1以表2为例，将细菌各项生化反应结果填入附赠的记录卡中，依次每三项为一组，若这三项反应均为阳性，则分别记为1、2、4，若为阴性，则相应项记为0。将每组三项的数值相加，共七组，组成一个七位数。
  4.2将所得七位数输入数据库系统中即可进行查询。
  4.3若某项生化反应结果较难判断，则按照阴性进行记录，但查询时，应在不定的生化反应前打钩。

5.注意事项
  5.1鉴定系统采用一次性材料生产而成，使用后请高压灭菌。
  5.2本系统目前仅用于革兰氏阴性细菌。
  5.3系统数据库将随时更新，不断扩大鉴定范围。

表2：博检革兰氏阴性细菌鉴定系统记录卡使用示例

样品来源(菌种编号):大肠埃希氏菌ATCC25922   时间:09.02.09   实验人:青岛海博生物

第一组

第二组

第三组

第四组

第五组

第六组

第七组

ONPG

ADH

LDH

ODC

CIT

H2S

URE

LAC

IND

VP

GEL

GLU

MAN

INO

SOR

RHA

SAC

MEL

AMY

ARA

OX

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

1

2

4

 1

2

4

+

-

+

+

-

-

-

+

+

-

-

+

+

-

+

+

-

+

 -

+

-

1

0

4

1

0

0

0

2

4

0

0

4

1

0

4

1

0

4

 1

2

0

5

1

6

4

5

5

2

检索结果:大肠埃希氏菌   id%=98.93%   T=0.99   R=191.72 很好的鉴定结果

6.质量控制

ONPG ADH LDH ODC CIT H2S URE LAC IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX
大肠埃希氏菌 ATCC25922   5164552
+ - + + - - - + + - - + + - + + - + - + -
霍乱弧菌 非O1群
+ - + + + - - - + + + + + - - - + - + - +
奇异变形杆菌 ATCC12453   05(7)14(6)00(2)0
- - - + V + + - - - V + - - - - V - - - -
肺炎克雷伯氏菌 ATCC35657   522(3)4(5)773
+ - + - + - V + - V - + + + + + + + + + -
粘质沙雷氏菌 ATCC14041   5307721
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