细菌学诊断
1 ．细菌的形态鉴定
细菌微小，必须借助于光学显微镜才能看到。细菌从形态上可分为球状、杆状和螺旋状三种基本类型。细菌细胞的基本构造是由细胞壁、胞浆膜、细胞浆、细胞核等部分构成。有的细菌除具有基本构造外，还能形成荚膜、芽胞、鞭毛、柔毛等特殊构造。细菌的形态、大小及染色是鉴定细菌的重要标志。
( 1 ）不染色标本的制备和检查：不染色标本主要用于观察活体微生物的状态和运动性，例如压滴标本。压滴标本是取洁净载玻片一张，在其上加一滴生理盐水（如是液体材料可以不加水），再用接种环在火焰上灼烧灭菌后蘸取适量的待检材料，然后在水滴上加盖一张洁净的盖玻片（注意不可有气泡）。检查时将标本置于显微镜载物台匕先用低倍镜测定位置，然后用高倍镜或油镜观察。
( 2 ）染色标本的制备
①抹片标本的制作：对于固体培养物，取一滴蒸馏水或生理盐水于清洁无尘玻片一端。左手持菌种管，右手持接种环于火焰上灭菌，右手小指与无名指夹住菌种管棉塞并取下，管口迅速通过火焰灭菌，以灭菌的接种环自菌种管内挑少许培养物，与蒸馏水棍合，涂布成约直径为1 厘米的涂片，涂片应薄而均匀。对于液体培养物不必加蒸馏水或生理盐水直接以无菌操作采用液体培养物1 一2 环作涂片即可。对于组织脏器，右手持无菌镊子夹住一块组织（如肝脾），左手用无菌剪刀剪取所夹组织，右手随即以新鲜切面在玻片的一端触及压印涂片。
涂片最后在室温中令其自然干燥。冬天气温较低或急用时，可将标本面向上，小心在酒精灯火焰近处略烘，加速水分蒸发，但勿紧靠火焰以免标本烤枯。
②抹片的固定：手执玻片的一端，即涂有标本的远端，标本面向上，在火焰包层快速地来回通过三次，约3 一4 秒钟，每次通过火焰后以手背不烫为宜。待冷后进行染色。固定的目的是杀死细菌，使菌体蛋白凝固于玻片上，不至于染色时被水冲去，便于着色。组织触片不宜用火固定，用化学法（如甲醇）固定。
( 3 ）染色方法
①单染色法：如亚甲蓝染色法，取经干燥、固定的涂片滴加亚甲蓝染液2 - 3 滴，使染液盖满涂片面，1-2 分钟后吸去染色液，用细小水流冲去多余染液，晾干或用滤纸轻轻吸干。结果是菌体呈蓝色，荚膜呈粉红色。
②复染色法：如革兰染色法，其操作步骤是取干燥并经火焰固定的涂片滴加草西酸钱结晶紫2 - 3滴于涂面上，染色1 分钟后水洗，并将玻片L 积水轻轻拭净。加革兰碘溶液2- 3 滴于涂片仁媒染1分钟后，倒去碘液轻轻拭净，再加95 ％酒精3 一5 滴于涂面L ，频频摇晃水溶液（或石炭酸复红溶液）复染30 秒，水洗后用油镜观察。结果是革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌为红色。
③女原姆萨染色法：触片经自然干燥后，不用火焰Ib1 定，直接滴加姬姆萨染色液数滴（染液中有甲醇，能起固定作用），经2 分钟后再加等量蒸馏水．轻轻摇晃使之与染液混合均匀。5 分钟后水洗干燥，或将玻片浸人盛有染色液的缸中，染色数小时或过夜，取出水洗、干燥、滴油镜检。
④芽胞染色法：取干燥火焰固定的涂片，滴加5 ％孔雀绿水溶液于涂片上，加热使其产生水蒸气，以不产生气泡为佳，约30 一60 秒，水洗30 秒，以石炭酸复红（或沙黄水溶液）．复染30秒，水洗、吹干镜检。菌体呈红色，芽胞呈绿色。
⑤鞭毛染色法：染色液有甲液（0 . 5 ％苦味酸）l 毫升、乙液( 20 ％靴酸液）l 毫升、丙液（5 ％钾明矾液）0 . 5 毫升、丁液（11 ％复红酒精溶液）0 . 15 毫升。各液在使用前，按顺序混合好可使用。染色法是取10 一12 小时的幼龄培育菌，用1 ％福尔马林液制成菌液，固定24小时后，于载玻片上涂成薄片。待自然干燥后，用上述染色液加温染色30 秒至1 分钟，然后静置1 一2 分钟，水洗，干燥，镜检。结果菌体呈深红色，鞭毛为淡红色。
⑥抗酸染色法：在固定后的涂片上，滴石炭酸一品红染色液，在载玻片下用火焰加热至发生蒸汽但不能产生气泡，约3 一5 分钟后用3 ％盐酸酒精脱色，至无红色脱落为止（约1 一3 分钟），再水洗后，以碱性亚甲蓝染液复染1 分钟。水洗，吸干，镜检。结核杆菌和副结核杆菌均为抗酸性细菌，故可以用此染色法和其他细菌相区别。结果是抗酸性菌染成红色，其他菌为蓝色。
⑦负染色法（墨汁衬色法）：于干净的载玻片卜加1 滴苯胺黑（或优质绘图墨汁），用灭菌的接种环取待检材料（以纯培养或病料）少许，均匀混合于苯胺黑（或墨汁）中，并立即将其涂散，使成薄的涂片，待其干后不用水洗即直接镜检，可见在黑色的背景上，出现不着色透明菌体，所以称负染色法。结果是螺旋体无色发亮，背景呈黑色。
⑧雷别格尔荚膜染色法：涂片、干燥，滴加2 ％一3 ％福尔马林龙胆紫染液，染色20 一30 分钟，立即水洗，干燥，镜检。结果荚膜呈淡紫色，菌体为深紫色。
⑨螺旋体染色法（刚果红法）：染色液是2 ％刚果红水溶液及1 % -2 ％盐酸酒精液，染色是在载玻片上滴加螺旋体的标本和2 ％刚果红水溶液各1 滴，混匀，涂成薄片。干燥后滴加1 % - 2 %盐酸酒精液，刚果红则由红变蓝，干燥后不必再用水冲洗，镜检。在蓝色背景下见有透亮未染色的螺旋体。
