克氏双糖铁琼脂的原理及使用方法

一、用途和原理：

 克氏双糖铁琼脂(Kligler Iron Agar)用于鉴别肠道菌发酵葡萄糖和乳糖，及产生硫化氢的生化反应。

蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素、矿物质;乳糖、葡萄糖为可发酵糖类，其产酸时通过酚红指示剂测出，酸性呈黄色，碱性呈红色；硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢，与铁盐生成黑色硫化铁;氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。

二、使用方法：

 1、称取克氏双糖铁琼脂55g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管(装量宜多些)，121℃高压灭菌15min，制成高层斜面，冷却后备用。

 2、挑取待检菌的新鲜培养物，穿刺接种混合克氏双糖铁琼脂斜面。接种时先在斜面划线，然后再穿刺底层。

 3、将试管放入培养箱内36±1℃培养18—24h。

 4、观察结果。观察斜面与底层的反应情况。

三、质量控制：

 配成的培养基为红色，下列菌株接种后于36±1℃培养24h结果如下：

  注：“A”为产酸，“K”为产碱。

四、常见问题：

 （1）克氏双糖铁试验时间为什么要控制在18-24h？KIA时间长了会怎样,短了会怎样？

 答：时间短了细菌发酵不够充分,现象不明显。时间长了细菌发酵过度,因为KIA是利用酸碱指示剂显色的，时间长了自然会引起一些改变而影响判断，同时各种副反应也会造成很大影响。相对来说,时间稍微长一点儿影响不大，但不能长得太夸张。

（2）MIU试验,为什么大肠埃希菌培养24h之后，培养基出现了气泡？志贺菌的培养基就没有？

 答：因为大肠埃希菌是产气的,而志贺菌不产气。

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