标准菌株验证鉴定步骤

1、菌种活化：干粉标准菌株           标准贮备菌株           工作菌株；

1.1金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃培养18-24小时。并观察菌落形态。

a.金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明；b.大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；c.铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；d. 枯草芽孢杆菌:表面粗糙不透明，镜检菌体有芽孢。

1.2白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂培养基平板或PDA琼脂平板上，30℃-35℃培养24-48小时。本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。

黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上，23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙。

1.3生孢梭菌：挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中，接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养18-24小时；或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上，30℃～35℃厌氧培养18-24小时。

2、菌种鉴定：

2.1金黄色葡萄球菌：

   革兰氏染色试验：革兰氏阳性菌(紫色)，葡萄状排列，球菌。

   兔血浆试验：接种1个单菌落于1支兔血浆溶液中，30℃-35℃培养至6小时，每半小时观察一次。凝固为阳性。金黄色葡萄球菌为阳性反应。

2.2大肠埃希氏菌：

  革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。

  IMVC生化试验：

2.3铜绿假单胞菌：

革兰氏染色试验：革兰氏阴性杆菌，红色。

氧化酶试验：将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿，用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落，涂在试纸上。在60s内变为蓝色或蓝紫色为阳性，不变色为阴性。

绿脓菌素试验：取斜面培养物接种于PDP琼脂培养基斜面上，培养24小时，加三氯甲烷3～5ml至培养管中，搅碎培养基并充分振摇。静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入1mol/L盐酸试液约1ml，振摇后，静置片刻，观察。若盐酸溶液呈粉红色，为绿脓菌素试验阳性，否则为阴性。本菌为绿脓菌素试验阳性。

荧光试验：接种于金氏B培养基(或假单胞菌产荧光色素培养基)上，36℃±1℃培养18-24小时，在366nm紫色灯下有蓝绿色荧光。

2.4枯草芽孢杆菌：

菌落形态：表面粗糙不透明，有皱摺。

镜检：用芽孢染色液染色，菌体有芽孢。

2.5白色念珠菌：

革兰氏染色试验：呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均匀。

念球菌显色培养基：30-35℃培养24-48小时，呈绿色菌落。

产芽管试验：挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35～37℃、1～3小时，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。

2.6黑曲霉：23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色，粗糙，有黑色孢子产生。

2.7生孢梭菌：

革兰氏染色试验：革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢。

哥伦比亚琼脂培养基试验：接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条件下培养48～72小时，应生长。

过氧化氢酶试验：滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。本菌为阴性反应。

3、需购买试剂：

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