化妆品中菌落总数的检查

   随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质量监测。是保障人民健康维护消费者的利益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会导致皮肤感染 。因此，化妆品细菌总数测定是便于判明样品被污染的程度。是对样品进行卫生学评价的重要依据 。

实验原理

  菌落总数是指化妆品检样经过处理，并在一定条件下培养后，得到的1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。
  菌落总数的测定（平板活菌计数法）是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落（即由一个单细胞繁殖而成，且肉眼可见的子细胞群体）的生理及培养特征进行的。也就是说，一个菌落即代表一个单细胞。

  测定时，首先将待测样品制成均匀的、一系列不同稀释度的稀释液，并尽量使样品中的微生物细胞分散，使之成为单个细胞状态存在（否则1个菌落就不能代表1个菌）；再取一定稀释倍数的一定量稀释液接种到培养基上，使其均匀分布。菌落由单个细胞生长繁殖而成，因此通过统计菌落的数目，可计算样品中的含菌数。
  由于所计算出的菌数是培养基上长出来的菌落数，故不包括死菌，因此菌落总数的测定又称为活菌计数。

菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便在对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
  前边所述的细菌菌落总数实际上仅为样品中总细菌数的一部分，其余细菌皆因种种原因未能长出。每种细菌都有其一定的生理特性，欲将各种细菌都有培养出来，就必须创造各种不同的培养条件，包括营养、温度、pH、需氧性等，去满足各种细菌的要求。在实际工作中，不可能也不必要培养出所有的细菌，所得结果只是能在肉汁营养琼脂上生长的嗜中温需氧性的菌落总数。
仪器设备

（1）培养箱：（36±1）℃。
（2）恒温水浴锅：（46±1）℃。
（3）天平。
（4）灭菌广口瓶或三角瓶：500ml。
（5）灭菌培养皿：皿底直径9.0㎝。
（6）灭菌吸管：1.0㎝、10.1㎝。
（7）灭菌小试管。
（8）玻璃珠：直径5㎜。
（9）均质机。
（10）灭菌刀、剪刀、镊子。
（11）酒精灯。

培养基和试剂

(1) 营养琼脂培养基
成分：
蛋白胨    10g    琼脂    15～20g
牛肉膏    3g    蒸馏水    1000mL
氯化钠    5g    pH  7.2～7.4
制法：将除琼脂以外的各成分溶于蒸馏水中，用15%的NaOHt调节pH使之在7.2～7.4。加入琼脂，于121℃下高压灭菌15min
(2) 生理盐水
成分：
NaCl    0.9g    蒸馏水    100ml
制法：一般每种检样配制250ml无菌生理盐水。称取2.2gNaCl,加入250ml蒸馏水溶解；分装于2支大试管中，每支9ml;再量取225ml装于500ml广口瓶或三角瓶中，并加入适量的玻璃珠；剩余的装入另1支试管中，包扎后于121℃下高压灭菌15min。
(3) 75﹪的酒精棉球。
实验步骤

1.菌落总数的检验程序（图1）      
              检样
                         ↓
        制成几个适当倍数的稀释度
                         ↓
 选择2～3个适宜的稀释度，个取1ml加入灭菌培养皿
                         ↓
       每皿内各加入适量的营养琼脂
          (36±1)℃↓
                    菌落计数
                          ↓
                        报告
            图1 菌落总数的检验程序

   在无菌条件下，将25ml(或25g)检样剪碎，放入装有225ml无菌生理盐水和适量玻璃珠的500ml广口瓶或三角瓶内，经充分振摇，形成10-1均匀稀释液。
   用1ml的无菌吸管吸取10-1稀释液1ml，注入装有9ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-2稀释液。再用此吸管吸取10-1稀释液各1ml于2个培养皿内。
  另取1ml的无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，注入装有 9ml无菌生理盐水的试管内，振摇混合均匀，即为10-3稀释液。再用此吸管吸取10-2稀释液各1ml于2个培养皿内。
  采用相同的方法吸取10-3稀释液各1ml于2个培养皿内。

  检样在36±1℃下48h后营养琼脂培养基中细菌的菌落数。

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