常见的李斯特菌快速检测技术

当前，李斯特菌快速检测方法为增菌以后，生化鉴定之前，对样本进行快速筛选，以缩小检测范围，减少检测任务，提高检测效率。快速检测方法主要包括酶底物显色技术、免疫学和分子生物学检测三大类。 

1即用培养技术

即用培养基技术则省掉了前期准备工作，可以直接检测样品，从而节约了大量人力成本。目前，商业化的固定培养基技术主要有两种：纸片法和即用平皿法。纸片法是指将显色培养基固定于纸片上，上方再盖一层带有方格的透明薄膜，以方便计数。即用平皿法是指用已倒有培养基的平皿，接种操作与传统涂板、划线法一样。其优点和纸片法一样，即省掉了前期准备工作，可以直接接种培养。此类产品主要有3M的Petrifilm试纸片、良润生物的MicroFast®测试片、北京陆桥的Easy test 系列产品及绿洲生化的微生物测试片等，已被许多研究被证明与传统方法的检测结果无显著性差别。

2免疫学检测法

该技术以抗原抗体免疫为基础，制备特异性克隆抗体检测细菌。目前国内外李斯特菌快速检测的此类技术主要包括：酶联荧光分析法(ELFA)、金标免疫层析技术、流式细胞技术等。

2.1酶联荧光分析法(ELFA) 

该方法是将李斯特菌抗原与单克隆抗体相结合，然后再将结合有碱性磷酸酶的抗体与李斯特菌抗原结合。通过检测荧光强度（荧光强度与抗原含量成正比）可推算出样品中李斯特菌的数量。ELFA 灵敏度比ELISA 高，并省去了ELISA 中的颜色反应，缩短反应时间；但缺点是成本较高，目前主要应用在自动酶联荧光免疫检测系统(VIDAS)上【7】。

2.2金标免疫层析技术

该技术的原理是将高度特异性抗单增李斯特菌抗原的抗体束缚在色原载体上，且可与固相支撑基质相分离。当检测样品中存在李斯特菌时，测试单元的试剂将会被展开，产生肉眼可见的确定性反应。阳性结果会在试纸窗有一指示阳性的检测线，有效测试还需要进一步确认控制线的存在，若无此线检测无效。北京良润生物科技有限公司开发的李斯特菌快速检测卡，可在5~10 min 完成检测，样品处理简单、操作灵活、运输方便、不需要其他辅助仪器，结果明显，是现场检测的理想方法，尤其是针对食品生产环境、即食食品中李斯特菌的检测。

3流式细胞术

流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段[6]，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数。流式细胞技术检测微生物主要是基于单个细胞的荧光标记技术，可对样品中死活菌总数、活菌数或特定细菌进行定量检测。该检测技术平均1min 即可得到检测结果，无需培养和样品制备，灵敏度可以达到1～100CFU，但仪器投入较大，检测成本相对较高，对样本的要求高，严重的制约这该技术在食品微生物检测中的应用。

4分子学检测方法

分子生物学检测方法主要包括核酸探针杂交技术、PCR 检测技术等。

4.1 DNA探针检测技术

DNA 探针法是将2 条碱基互补的DNA 链在适当的条件下杂交，通过检测样品与标记性DNA 探针之间形成的杂交分子来检测样品中的单增李斯特菌，测定放射性或荧光强度即可得出样品中单增李斯特菌的个数[8]。随着探针技术的逐渐成熟，人们将多个DNA 特异性探针固定到芯片上，制成基因芯片，采用荧光标记法提高检测灵敏度。该技术可同时用于多种不同种类病原菌或毒素的检测，减少实验次数，减小工作量。

4.2 PCR 检测技术

PCR 是近年来广泛应用的分子生物学检测方法，在单增李斯特菌的检测中以其遗传物质高度保守的核酸序列（常用的靶序列包括hly、actA、prfA等）设计引物进行扩增。该方法特异性好，但灵敏度低，对样品进行前处理后再进行扩增，可以提高检出率和检测灵敏度。PCR 技术还可对单增李斯特菌进行定量检测。国内外目前主要应用的PCR技术包括：实时荧光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒温扩增、RT-PCR 方法、IMS-PCR 检测技术等［9］。

IMS-PCR 检测技术是将免疫磁珠与PCR 结合，建立新的检测方法—磁免疫PCR。此方法结合免疫磁性和PCR 技术的优点如下：首先，利用免疫磁珠的抗原抗体反应，与单增李斯特菌快速结合，达到浓缩目的，缩短检测周期；其次，利用PCR 方法良好的特异性克服了免疫磁珠在这方面的不足，提高检测效率；再次，利用免疫磁珠良好的敏感性，提高PCR 方法的灵敏度。

上一篇：常用的灭菌消毒法

下一篇：培养基的分类及定义