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培养基整体性能的评估



录入时间:2015-5-4 10:52:19 来源:青岛海博生物

理化指标

理化指标通常由生产厂商通过对原材料、生产工艺、生产过程进行质控,使用者通常用感官检查或pH测定进行确认。

理化指标包括培养基的色泽,培养基的水分含量,培养基的澄清度,培养基的PH,固体培养基的凝胶程度。

微生物学指标

培养基对目标菌的促生长能力(生长率),培养基对非目标菌的抑制能力(选择性),培养基的指示能力(生化特性)

微生物学评估方法-
使用一套合适的质控菌株进行测试

定量法—培养基生产厂家或对培养基质量有特殊要求的实验室对培养基质控 ;

半定量法—实验室对培养基的质控;

定性法—实验室对培养基的质控。

固体培养基的生长率测试-定量法

选择合适稀释度的质控菌悬液(目标菌)0.1mL,均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。并按标准规定的培养条件培养平板。

计算生长率PR : 

PR = NS/N0

PR:生长率。

NS:待测培养基平板上得到的菌落总数。

N0:参比培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应≥100CFU) 

质控菌株的要求

具典型反应特性的生长良好的阳性菌株 ;

弱阳性菌株(对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株); 

不具有该特性的阴性菌株; 

部分或完全受抑制的菌株;

固体培养基的生长率测试半定量法

将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

1ul接种环按图划线接种:

计算生长指数G

每条有比较稠密菌落生长的划线则G1,每个培养皿上G最大为16

如果仅一半的线有菌落生长,则G0.5

如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线的一半,则G0

记录每个平板的得分总和便得到G

固体培养基的生长率测试-定性法

将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

1ul接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线(细菌),或用接种针直接挑取斜面培养物点种接种(霉菌)。并按标准规定的培养条件培养平板。

培养后按以下方法对培养基计分:

表示无生长;

表示微弱生长;

表示生长良好。

固体培养基生长率评价标准

非选择性固体培养基和固体计数培养基PR值应不小于0.7G值应大于6

选择性固体培养基PR值一般应不小于0.5,最低应为0.1 

选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7 

定性法目标菌得分应为2

固体培养基选择性测试-半定量法

将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

1μl接种环取选择性测试工作菌悬液1环,在待测培养基表面划六条平行直线(如图),同时接种两个平板,划线时可在培养基下面放一个模板图,按标准规定的培养条件培养平板。

固体培养基选择性测试-半定量法

计算G

每条有比较稠密菌落生长的划线则G1,每个培养皿上最多为6分。

如果仅一半的线有菌落生长,则G0.5

如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线的一半,则G0。 

评价标准:

G应小于6

固体培养基生化特性测试-定性法

分别观察质控菌株(包括目标菌和非目标菌)在培养基上形态、颜色及生化特征。

评价培养基的指示系统是否正常。

液体培养基测试-半定量法

混合菌接种:在待测液体培养基中接种10~100CFU目标菌,同时接种1000~5000CFU非目标菌,按标准规定条件培养。

非目标菌接种:在待测液体培养基中分别接种上述非目标菌,按标准规定条件培养。

10μL接种环取1环混合菌接种培养物,划线接种于特定的选择性平板上,按标准规定条件培养。

吸取非目标菌接种培养物10μL,以涂布法或倾注法接种于非选择性平板上(TSA),按标准规定条件培养。

评价标准

目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU,则生长率良好。

非目标菌在非选择性平板上菌落数应<100CFU,则表示待测培养基选择性良好。

 

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