李斯特菌的鉴定和验证

（1）李斯特菌能水解七叶甘，除格氏李斯特菌外，其他李斯特菌均不能分解甘露醇产酸。在牛津琼脂平板上，李斯特菌菌落直径为2〜3mm，带有黑褐色或黑色晕轮（七叶苷水解所形成），菌落的中心经常是下凹的；在PALCAM琼脂上，李斯特菌菌落直径为1.5〜2mm，绿色并带有黑色的晕轮（或菌落中心为黑色）。

（2）验证时，挑取5个典型的菌落，每个菌落划线接种到胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂（TSYEA）上，置于35℃或37℃需氧培养24〜48h,分离平板上的单个菌落以确保菌株的纯度。

（3）检查TSYEA平板上生长的单个菌落,使用亨利描述的菌落特征进行分离。亨利认为李斯特菌在TYS平板上生成细小的、半透明的菌落，菌落呈蓝色、蓝绿色或蓝灰色，菌落表面为细小的颗粒状,类似于粗糙的磨砂玻璃。

 从TSYES平板上挑取一个单个的菌落，分别接种于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉汤
TSYEB试管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂TSYEA斜面上，25℃培养18〜24h。

（4）①用TSYEB肉汤培养物进行菌体运动试验和革兰氏染色。李斯特菌属呈翻筋斗运动，注意与振荡培养后非致病性李斯特菌的快速直线运动进行区别。李斯特菌为小的、革兰氏阳性的、无孢子的短杆菌。

②用TSYEB斜面上的生长物进行过氧化氢酶和氧化酶试验。李斯特菌过氧化氢酶试验阳性，氧化酶试验阴性。

③用TSYEB斜面上的培养物接种下列培养基，进行验证和鉴定试验：

a. 接种D-葡萄糖、D-水杨苷、L-鼠李糖、D-木糖发酵肉汤(含有溴甲酚紫；见附
录1，置35℃或37℃培养7d每天检查产酸的情况(生化管由紫色变为黄色)。

b. 接种硝酸盐蛋白胨水，检査硝酸盐的产生情况。在35℃或37℃培养 5d。

c. 使用金黄色葡萄球菌和马红球菌进行CAMP试验。在35℃或37℃培养24h。

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