所有微生物都受到其生存环境中pH的影响。通常,选择性物质的存在会缩小它们生长的pH范围。有时，培养基的酸度或碱度也能作为一种生长选择因子。而对于生化测试培养基，微生物在基质中显示活性的的范围比生长所需的pH范围窄。因此，将培养基的pH调至预期的范围内是很重要的。当实验室根据培养基成分自己配制培养基时，必须检测并调整pH。必须指出的是，即使是生产厂商提供的现成的合成脱水培养基(尤其是对一些库存的脱水培养基)，在制成实验用培养基后也需要对其最终pH进行测定。
测定培养基pH的最准确的方法是使用pH计，使用前必须用已知pH的（通常pH为4-7)标准缓冲溶液进行校准。将pH计的电极用蒸馏水冲洗后浸入到烧杯的培养基中，就可以从pH计的刻度读出培养基的pH。每个生产厂商对每种不同pH计都提供有详细的操作说明。
配制培养基时，使用带机械搅拌的pH计可以很容易地调整pH。
培养基位在能够不停搅拌的容器(如大烧杯）中配制，最好使用磁力搅拌器，磁力搅拌器带有聚乙烯或聚四氟乙烯包装的磁棒。含琼脂的培养基需在融化后调整其pH，用可加热的磁力搅拌器很容易办到。调节pH时用已知pH的标准缓冲液溶液先对pH计进行校准。然后将复合电极和电阻温度计(如果有)置于培养基，从烧杯远离电极的一端缓慢加人适量的盐酸和氢氧化钠，保到培养基达到并保持所需的pH。
pH计的温度补偿应考虑到温度对电极系统的影响：在一些稀释液和培养基中，pH随温度的变化而有相当大的变化。对于液体培养基和稀释液而言，通常既可以在25℃下,也可以在其使用时的温度下调整和测定。
琼脂培养基必须在溶解后进行pH的调整，溶解的温度在45℃以上。因此，固体培养基应在其使用温度确定pH。这时应使用平头的复合电极，同时用手动校准pH计的温度补偿。在制备培养基时,若测定出培养基在熔化状态和凝固状态的pH有所不同时，说明在调整pH产生误差。
同样，制备的培养基在加热灭菌处理(如高压灭菌〉时，也可能会产生pH的变化。对于脱水培养基，生产厂商己考虑到这一点，通常不谣要再调整其pH。但应认真核对待用培养基的pH。如果脱水的琼脂培养基在再次溶解或制备的过程中必须调整pH，那么最好在灭菌操作步骤之后用过滤灭菌的盐酸和氢氧化钠溶液进行调整，以避免造成因再次灭菌而形成的培养基的过度加热。当用不同的原枓或药品制备培养基时，必须在高压灭菌后检测培养基的pH。此外，如果发现培养基的在每次高压灭菌后都发生相同变
化，可在配制培养基时对pH进行适当调整。但仍需测定培养基灭菌后的最终pH。
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