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致病性葡萄球菌的鉴定



录入时间:2015-3-12 11:23:36 来源:青岛海博生物

   致病性葡萄球菌的鉴定,一般实验室都根据以下特征,其中尤以血浆凝固酶试验意义最大。

1.产生金黄色色素。

2.对家兔或羊红细胞有溶血作用。

3.分解甘露醇,产酸不产气。

4.血浆凝固酶试验阳性。

5.耐热DNA 酶试验阳性。

血浆疑固酶试验

【原理】

  致病性金黄色葡萄球菌能产生一种血浆凝固酶,可使枸橼酸钠或肝素抗凝的人或兔等动物血浆发生凝固,凝固血浆沉积于菌体表面,阻碍吞噬细胞的吞噬:即使被吞噬也不易被杀死。它与葡萄球菌感染局限化有关。

【材料】

  金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌培养物各一支,兔血浆、生理盐水、小试管。

【方法】

1.取无菌试管三支,分别加入兔血浆,每支2~3ml

2.以接种环从血琼脂平板上挑取二种葡萄球菌菌落,分别混悬于二支兔血浆内,另一支为对照。

3.将三支兔血浆放置37℃水浴箱内孵育2 小时。

4.取出观察结果,阳性为试管内血浆凝固成块状。

耐热DNA 酶试验

【原理】

  致病性葡萄球菌能产生DNA 酶,它可特异地分解DNA 的磷酸戊糖联结的磷酸二酯键;且有明显耐热性,经18015 分钟或602 小时也不灭活。此酶最适pH9.0,在含DNA 基质的琼脂一Tris 缓冲液中(PH9.0),随DNA 被分解指示剂甲苯胺蓝从蓝色变粉红色。

【材料】

  经100℃煮沸15 分钟后的金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌24 小时液体培养物;甲苯胺蓝-DNA-琼脂(PH9.0)

【方法】

1.取装有3ml 甲苯胺蓝-DNA-琼脂培养基的小试管置沸水浴中溶化,浇小玻片一块(琼脂全部用完),待琼脂冷却凝固后,以3mm 直径打孔器打2 个孔。

2.用无菌滴管吸取加热冷却后的金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌菌液,加人不同的小孔中,置37℃培养2~3 小时后观察结果。

3.凡小孔周围出现透明粉红色小圈者为阳性,小孔周围仍为蓝色不透明者为阴性。

注:指示剂甲苯胺蓝在酸性中呈红色,在中性或弱碱性溶液中呈蓝色。

 

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