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诱变育种的的基本程序及操作要点



录入时间:2015-3-10 10:13:57 来源:青岛海博生物

、诱变育种基本程序

微生物诱变育种一般按照图12-1所示工作程序进行。

、诱变育种的操作要点

(一出发菌株的选择

用来进行诱变的菌株称为出发菌株。诱变育种的目的在提高微生物代谢产物的产量、改进质暈或产生新的代谢产物。此,选择出发菌株对诱变效果尤为重要。
   1.作为出发菌株疢对诱变剂敏感,变异幅度大。

2然界分离到的野型菌株,对诱变剂敏感,易发生向突变。由发突变经
筛选得到的菌株也属于野生
菌株。

3.经诱变处理获得的产菌株再诱变时易出现负突变,继续提高产量较难,不易直接作出菌株。

4.表现出基因发生改变的单倍体细胞,酵母菌二倍体细胞很稳定,应该选异宗接合的单倍体菌株或用子囊孢子进行诱变。

5.选择单核或细胞核少的细胞,在霉菌的诱变育种中,多采用分生孢子或孢囊孢
子进行诱变处理。

(二)细胞悬液的制备

1.采用生理状态一致的单细胞或单子进行诱变处理,不能使细胞均匀地接触诱
变剂,还可以减少分离性表
延迟现象的发生。因此,诱变处理前的细胞应尽可能达到同步培养和对数生长期状态。

2 一般诱变处理真菌孢子或酵母菌营养细胞,其细胞悬液浓度应为106个/ml而细菌营养细胞或放线菌孢于浓度为108/ml,细胞悬液浓度可用平板计数法和血球计数板法测

3.般情况使用物理诱变剂处理时,用生理盐水配制细胞悬液;而使用化学诱变剂处理时,由于pH变化易引起诱变剂性质的改变而都使用缓冲液配制细胞悬液。

(三)诱变剂和处理方法的选择

1.诱变剂的选择 对诱变剂的要求是使遗传物质改变大,难于产生回复突变,这样获得的突变株突变性状稳定。亚硝基胍(NTG)和甲基磺酸己酯(EMS)等烷化虽能引起高频度的变异,它们多是引起碱基对转换突变,易发生回变;而能引起染色体大损伤或移码的紫外线、γ-射线等诱变剂,其有优越性能。

2.诱变剂量的选择 选择最适诱变剂量,也就是在提高突变率的基础上,即能扩大变异幅度,又能使变异正向突变范围移动的剂量。研究方向正向突变多出现在偏低剂量中,形态变异多发生在偏高剂量中,而一般形态变异多趋向于降低产量。
   3.诱变处理方法的选择

1紫外线与光复活的交替处理  能使紫外线诱变作用得到显著增强。多次紫外线照射后,并在每次照射后进行-次光复活,突变率将大大提高。

2诱变剂的复合处理有一定的协同效应,复合处理有以下几种方式:两种或多种
诱变因子先
使用;同—种诱变剂重复使用;两种或两种以上诱变剂的交替使用等。

(四)中间培养

突变基因的出现并不意味着突变表的出现,表型的改变落后于基因型改变的现象,称为表型延迟。其原因是分离性延迟和生理性延迟造成的。为此,必须将诱变处理的菌液进行中间培养,即将菌液接入完全液体培养基中培养过夜。

 (五)突变株的分离

 1.营养缺陷性菌株的分离

 (1)淘汰野生型、浓缩缺陷型

 (2)缺陷菌株的检出

 (3)营养缺陷型的鉴定

 2.抗性突变菌株的分离

 (1)抗药性突变株的分离

 (2)抗代谢结构类似物突变菌株的分离

 3.产量性状突变的分离

 

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