4、仪器和试剂
4．1 仪器
实验室常用设备、低温高速离心机、低温冰箱(-80℃)或液氮罐、生物安全柜、恒温培养箱、恒温水
浴、灭菌设备、匀浆器等。
4．2试剂
4.2.1 营养肉汤培养基
牛肉膏 2.5 g
胰蛋白胨 5.0 g
氯化钠 2.5 g
磷酸氢二钾 1．3 g
加蒸馏水至500 mL，加热溶解，调pH至7.4，分装后0.103 MPa灭菌20 min，4℃保存备用，保存
期不超过半年。
4.2.2 营养肉汤琼脂培养基
琼脂粉 1.5 g
加营养肉汤培养基至100 mL，加热融化后调节pH为7.4，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.3 底层培养基
4.2.3.1 配制方法
在400mL灭菌的1.5％琼脂培养基(100℃)中依次加入磷酸盐贮备液8 mL，40％葡萄糖溶液
20mL，充分混匀，冷却至80℃左右时按每平皿25 mL(相对于90 mm平皿)制备平板，冷凝固化后倒
置于37℃培养箱中24 h，备用。
4.2.3.2 磷酸盐贮备液(Vogel—Bonner minimal medium E，50倍)
磷酸氢钠铵 17．5 g
柠檬酸 10．0 g
磷酸氢二钾 50．0 g
硫酸镁 1．O g
加蒸馏水至100 mL溶解，0.103 MPa灭菌20 min。
注：待其他试剂完全溶解后冉将硫酸镁缓慢放人其中继续溶解，否则容易析出沉淀。
4.2.3.2 40％葡萄糖溶液
葡萄糖40．0 g加蒸馏水至100 mI．，O．055 MPa灭菌20 min。
4.2.3.4 1.5％琼脂培养基
琼脂粉6.0加入400 mL锥形瓶，加蒸馏水至400 mL，融化后，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.4 顶层培养基
加热融化顶层琼脂，每100 mL顶层琼脂中加10 mL组氨酸生物素溶液(0.5 mmol／L)。混匀，分
装在4个烧瓶中，0.103 MPa灭菌20 min。用时融化分装小试管，每管2 mL，45℃水浴中保温。顶层
琼脂和组氨酸生物素溶液(0.5mmol／L)配制如下。
4.2.4.1 顶层琼脂
琼脂粉3.0 g，氯化钠2.5g加蒸馏水至500 mI。，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.4.2 组氨酸一生物素溶液(0.5mmol／L)(诱变试验用)
D-生物素(相对分子质量244)30．5 mg和L-组氨酸(相对分子质量155)19．4 mg加蒸馏水至
250 mL，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.5特殊试剂及培养基
4.2.5.1 0.8％氨苄青霉素溶液(鉴定菌株用，无菌配制)
氨苄青霉素40 mg用氢氧化钠溶液(0.02 mo1／L)稀释至5 mL，保存4℃冰箱备用。
4.2.5.2 0.1％结晶紫溶液(鉴定菌株用)
100 mg结晶紫，溶于无菌水至100 mL。
4.2.5.3 L-组氨酸溶液和D-生物素溶液(0.5mmol／L)(鉴定菌株用)
L-组氨酸0.4043 g和D-生物素12．2 mg分别溶于蒸馏水至100 mL，0.103 MPa灭菌20 min，保存
于4℃冰箱备用。
4.2.5.4 0.8％四环素溶液(用于四环素抗性试验和氨苄青霉素四环素平板)
40 mg四环素用盐酸缓冲液(0.02 mol／L)稀释至5 mL，保存于4℃冰箱。
4.2.5.5 氨苄青霉素平板(用作TA97、TA98、TAl00菌株的主平板)和氨苄青霉素四环素平板(用作
TAl02菌株的主平板)
每1000 mL由以下成分组成：
底层培养基 980 mL
组氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL) 10 mL
生物素(0.5mmol／L) 6 mL
0.8％氨苄青霉素溶液 3.15 mL
0.8％四环素溶液 0.25 mL
四环素仅在使用对四环素有抗性的TAl02时加入。各成分均已分别灭菌或无菌制备。
4.2.5.6组氨酸-生物素平板(组氨酸需要试验用)
每1000 mL中由以下成分组成：
底层培养基 984 mL
组氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL) 10 mL
生物素(0.5 mmol／L) 6 mL
各成分均已分别灭菌。
4.2.5.7二甲亚砜(DMSO)
光谱纯，无菌。
