用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1.0 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL0.85％生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
另取1 mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，如此每递增稀释一次，即换用1次1 mL灭菌吸管或吸头。
根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL稀释液于MRS琼脂平板或MC琼脂平板进行表面涂布，每个稀释度作两个平皿。MC琼脂平板用于嗜热链球菌的计数。含双歧杆菌的样品需绝对厌氧，置36 ℃±1 ℃恒温箱内培养48 h±2 h,不含双歧杆菌的样品需兼性厌氧，置36 ℃±1 ℃恒温箱内培养48 h±2 h,培养后选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。乳酸菌在MRS和MC培养基上菌落生长形态特征。
挑取3个或以上的可疑菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属和双歧杆菌属接种于MRS琼脂平板，双歧杆菌需绝对厌氧，置36 ℃±1 ℃恒温箱内培养48 h±2 h，不含双歧杆菌需兼性厌氧，置36 ℃±1℃恒温箱内培养48 h±2 h。
鉴定
涂片镜检：乳杆菌属细胞形态多样，从长的杆状和细长杆状到弯曲杆状及短杆状，一般形成链。通常不运动。无芽胞，革兰氏染色阳性。嗜热链球菌形态为球形或球杆状，直径为0.5 μm～2.0 μm，细胞成对或成链排列，无芽胞，革兰氏染色阳性。双歧杆菌属细胞呈多样形态，有较规则短杆状或纤细杆状具有尖细末段的细胞，也有呈球形者，可形成各种分支或分叉形。无芽胞，革兰氏染色阳性。
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