免疫磁珠捕获与分离大肠埃希氏菌

应按照生产商提供的使用说明进行免疫磁珠捕获与分离。当生产商的使用说明与下面的描述可能有偏差时，按生产商提供的使用说明进行。

将Eppendorff 管按样品和质控菌株进行编号，每个样品使用1 Eppendorff管，然后插入到磁板架上。在漩涡混合器上轻轻振荡E.coli O157 免疫磁珠溶液后，用开盖器打开每个Eppendorff 管的盖子，每管加入20μLE.coli O157 免疫磁珠悬液。

取mEC+n 肉汤增菌培养物1mL，加入到Eppendorff 管中，盖上盖子，然后轻微振荡10s。每个样品更换1 只加样吸头，质控菌株必须与样品分开进行，避免交叉污染。

结合：在18℃～30℃环境中，将上述Eppendorff 管连同磁板架放DynalMX1 样品混合器上转动或用手轻微转动10min，使E.coli O157 与免疫磁珠充分接触。

捕获：将磁板插入到磁板架中浓缩磁珠。在3min 内不断地倾斜磁板架，确保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起来，此时，在Eppendorff 管壁中间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物。

吸取上清液：取1 支无菌加长吸管，从免疫磁珠聚集物对侧深入液面，轻

轻吸走上清液。当吸到液面通过免疫磁珠聚集物时，应放慢速度，以确保免疫磁珠不被吸走。

免疫磁珠的滑落：某些样品特别是那些富含脂肪的样品，其磁珠聚集物易于滑落到管底。在吸取上清液时，很难做到不丢失磁珠，在这种情况下，可保留50μL～100μL 上清液于Eppendorff 管中。如果在后续的洗涤过程中也这样做的话，脂肪的影响将减小，也可达到充分捕获的目的。

洗涤：从磁板架上移走磁板，在每个Eppendorff 中加入1mL PBSTween20洗液，转动磁板架3 次以上，洗涤免疫磁珠混合物。

免疫磁珠悬浮：移走磁板，将免疫磁珠重新悬浮在100μL PBS-Tween20 洗液中。

涂布平板

用漩涡混合器将免疫磁珠混匀，用加样器各取50μL 免疫磁珠悬液分别转移至CT-SMAC 平板和改良CHROMagar O157 显色琼脂平板一侧，然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半，再用接种环划线接种平板的另一半。待琼脂表面水分完全吸收后，翻转平板，于36℃±1℃培养18h～24h

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