O157检验方法的条件优化

1.增菌培养基：国际上采用的为mEC+n、mTSB+n、 EHEC Enrichment Broth (EEB＝TSB)+CCV、BPW-VCC。通过比较，mEC与mTSB差异不大，且为我国“污染物监测网”和“全国肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻”检测中普遍使用。

2.增菌培养温度：国际方法中有3个培养温度：NMKL为41.5±0.5℃  、 USDA/BAM为35±2℃，其余为37℃。实验结果表明，在41.5±0.5℃时，温度作为一个选择性因子，能够抑制杂菌丛的生长，但同时O157也部分地受到抑制。在36±1℃ 时，O157的相对量较多。

3.分离培养基：目前国际上采用的培养基有：SMAC、CT-SMAC、Rainbow agar等，本实验分别使用了SMAC、CT-SMAC、CHROMagar、改良CHROMagar琼脂平板，结果表明：改良CHROMagar > CHROMagar > CT-SMAC > SMAC。

4.平板分离方法的选用：

  （1）常规方法：FDA、CCFRA方法均使用2块平板，涂布：取0.1ml或适当稀释后的增菌液0.1ml进行，划线取满环。通过实验表明，选择2块平板， CT-SMAC和改良CHROMagar ，取增菌液0.1ml先涂布一半，再划线一半，可以减少操作误差，得到较好的分离效果。

（2）磁珠方法（IMS）：国际上使用磁珠量为20 μl ，选择2块平板， CT-SMAC和改良CHROMagar ，取磁珠悬液各50 μl，先涂布一半，再划线一半，可以减少操作误差，同样得到较好的分离效果。

5. 血清学：使用O157、H7因子血清鉴别。但哈夫尼亚、变形、异常沙门菌、柠檬酸杆菌等与O157可能有交叉反应，需要用生化进一步鉴定。

6.生化项目：一般使用Indole、MUG等作为筛选试验，API20E、VITEK GNI或GNI+作为鉴定试验。本法使用TSI、MUG作为筛选，MUG可筛除E.coli、宋内氏、柠檬酸杆菌、肠杆菌、克雷伯氏菌、哈夫尼亚菌、粘质沙雷氏菌、耶耳森氏菌等。TSI可筛除沙门菌、志贺氏菌、变形、部分普罗菲登氏菌、摩根氏菌等。 API20E、VITEK GNI或GNI+作为鉴定试验。

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