单增李斯特菌对小鼠的毒力试验与MPN计数

将纯培养物接种于TSB-YE中, 于30℃培养24 h, 离心, 弃上清液，用0.85灭菌生理盐水制备成浓度为1010cfu/mL的菌悬液, 取此菌悬液进行小鼠腹腔注射 3-5只, 每只0.5 mL，观察小鼠死亡情况。致病株于2-5d 内死亡。试验时可用已知菌作对照。单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌（L.ivanovii）对小鼠有致病性。

MPN计数法

1 9管法，取检样25g（mL）加入装有225mL LB1增菌液中，均质制成1:10稀释液，用灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL LB1增菌液的试管内，振摇试管混匀，制备1:100的稀释液。

2 另取1 mL灭菌吸管，按上条操作依次制备10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1 mL灭菌吸管。

3 根据对检样污染情况的估计，选择三个连续的适宜稀释度，每个稀释度接种3支含有9mL LB1增菌液的试管，每管接种1 mL。于30℃±1℃培养24h，移取1 mL，转种于9mL LB2增菌液内，于30℃±1℃培养18h-24h。

4 分离、鉴定方法同第一法。

结果报告 根据证实为单核细胞增生李斯特氏菌阳性的试管管数，查MPN检索表（附录B），报告每g（mL）单核细胞增生李斯特氏菌的MPN值。

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