营养琼脂
尽可能将所有经滤膜过滤后，在36℃±1℃培养了20h～24h，将需验证的可疑菌落划线接种营养琼脂培养基，于36℃±1℃培养20h～24h。检查再次纯化的菌落，并将最初显红褐色的菌落进行氧化酶试验。
氧化酶试验
取2 滴～3 滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在10s 内显深蓝紫色的视为阳性反应。也可以按照商品化氧化酶测试产品的说明书进行该项测试。
金氏B（King′s B）培养基
将上述呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏B 培养基上，于36℃±1℃恒温箱培养1d～5d。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光性，将5d 内产生荧光的菌落记录为阳性。
乙酰胺肉汤
将5.4.1 中的纯培养物接种到装有乙酰胺肉汤的试管中，在36℃±1℃培养20h～24h。然后向每支试管培养物加入1 滴～2 滴钠氏试剂，检查各试管的产氨情况，如表现出从深黄色到砖红色的颜色变化，则为阳性结果，否则为阴性。
计数
将产生绿脓色（蓝色/绿色）或氧化酶反应呈阳性，在紫外灯下产生荧光，且在乙酰胺肉汤中产氨的所有菌落证实为铜绿假单胞菌，并进行计数。
通过计数培养后的滤膜上的菌落以获得铜绿假单胞菌的数量。其他产生荧光或者呈红棕色的菌落需要进一步验证。
注：最初滤膜上显荧光的菌落经氧化酶反应均呈阳性，因此不需在这个测试中计数
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