倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少为3 mm（直径90mm 的平皿，通常要加入18ml～20mL 琼脂培养基）。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。如果平板需贮存，或者培养时间超过48h 或培养温度高于40℃，则需要倾注更多的培养基。凝固后的培养基应立即使用，或存放于暗处和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培养基成份的改变。在平板底部或侧边做好标记，标记的内容包括名称、制备日期和（或）有效期。也可使用适宜的培养基编码系统进行标记。 将倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延长贮存期限。为了避免冷凝水的产生，平板应冷却后再装入袋中。贮存前不要对培养基表面进行干燥处理。对于采用表面接种形式培养的固体培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭开平皿盖，将平板倒扣于烘箱/培养箱中（温度设为25℃～50℃）；或放在有对流的无菌净化台中，直到培养基表面的水滴消失为止。注意
不要过度干燥。商品化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。
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