凝胶法测定细菌内毒素

    凝胶法是通过在有内毒素存在的情况下利用鲎试剂产生凝集反应来检测或定量内毒素的方法。在标准环境中，能够使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度。 

1、试验前的准备工作与材料 
   试验所用器皿需经处理除去可能存在的外源性内毒素（常用的方法是250℃干烤至少1h，也可用其他适宜的方法）。同时试验所用器皿应确保不干扰细菌内毒素的检查；试验操作过程应防止微生物的污染。材料与器具：①细菌内毒素工作标准品；②鲎试剂；③细菌内毒素检查用水；④旋涡混合器和37℃士1℃试管恒温仪；⑤10mm*75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿；⑥稀释容器（大口径试管、小三角瓶、小磨口瓶、抗生素瓶或安瓿）；⑦移液器材（1、2、5、0.5移液管或移液枪）；⑧试管架或试管浮板；⑨其他用具：酒精灯、消毒酒精棉球、剪刀、砂轮、镊子、封口胶布、油性笔、标记纸。 

2、鲎试剂灵敏度复核：当使用新一批鲎试剂或试验环境中发生了可能会影响检验结果的改变时，须进行鲎试剂灵敏度复核试验。 
    根据鲎试剂灵敏度的标示值，将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌 内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混合15min，然后制成2.0入、入、0.5入和0.252等4个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30s，取装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm*75mm试管或复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿，等体积加入内毒素标准溶液。每一个浓度平行做4管，同时在2管中加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管 中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37士1℃适宜恒温器中，保温60士2min。 将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180℃时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。 
    若最大浓度2.0入管均为阳性，最低浓度0.25入管均为阴性，阴性对照管为阴性时，试验方为有效。按式计算反应中点浓度的几何平均值，即为鲎试剂灵敏度的测定值（入c）。    

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