第一，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。将蛋白质抗原按分子大小和所带电荷的不同分成不同的区带；
第二，电转移。目的是将凝胶中己分离的条带转移至硝酸纤维素膜上；
第三，酶免疫定位，该步的意义是将前两步中己分离，但肉眼不能见到的抗原带显示出来。
将印有蛋白抗原条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标记的第二抗体反应后，再与能形成不溶性显色物的酶反应底物作用，最终使区带染色。本法综合了SDS-PAGE的高分辨率及ELISA的高敏感性和高特异性，是一种有效的分析手段，在蛋白质化学中应用广泛，既可用于分析抗原组分及其免疫活性，也可用于疾病的诊断。免疫印证实践中最早的应用是HIV感染的血清学诊断。病毒感染细胞或可溶性病毒、细菌材料等都可以采用免疫印迹方法检测。
