植物组培之花粉培养

   花粉培养是指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株。且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。但缺点是较比花粉培养难度大。

 2.1花粉的分离

 取新鲜未开的花蕾用自来水冲冼10min，以75%的酒精消毒10～15min，无菌水冲冼2次，再用10%漂白粉上清液浸泡20min，无菌水冲冼3～4次。然后将花药放到加有基本培养基的小烧杯中，用注射器的内管在烧杯的壁上挤压花药，使花粉从花药中释放出来。用尼龙筛过滤掉药壁组滤液再经低速离心（100～160rpm），上面的碎片可用吸管吸掉，再加入新鲜培养基。连续进行两次过滤，到每毫升含103～104个花粉的浓度就可以了。

 简单的方法是花粉从花药中挤出后，用镊子取出花粉空壳，放在培养基上培养。此法适于微室栽培，但往往有药壁等体细胞混入。

 2.2花粉的预处理

 ①低温处理

在花粉第一次有丝分裂期进行低温处理。②重力的作用

在从花蕾中取出花药前1小时，在5℃条件下进行低温离心机离心，可提高单倍体的诱导率。

 2.3培养基成分

在花粉培养中可添加一些物质，有促进生长的作用。培养基选用Nitsch作基本培养基，含有诸如硝酸钙、硫酸、柠檬酸铁、酵母浸出液和椰子胚乳等。

  2.4花粉培养方法

 ①微室培养法

 取含有50～80粒花粉的一滴培养液放在微室培养装置中，为了防止花粉破裂，应在低倍条件（4℃以下）接种，然后在20℃下培养。

 ②看护培养法

在装有50ml液体培养基的小培养皿中，用解剖针撕开花药释放出花粉，形成花粉悬浮液，最后稀释至0.5ml培养基中，含有10个花粉粒的细胞悬浮液。看护培养时，把花药放在琼脂培养基表面上，然后在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的花粉粒悬浮液，滴在每个小圆片滤纸上。培养在25℃和一定光照强度下，大约一个月长出细胞群。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。

上一篇：植物组培之花药培养

下一篇：非洲菊的组织培养