实验：显微镜油浸系物镜的使用

实验目的 

1．复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术； 

2．了解油浸系物镜的基本原理； 

3．掌握油浸系物镜的使用方法。 

实验内容 

1．学习油浸系物镜的使用方法。 

2．用压滴法观察酵母菌、枯草芽孢杆菌活菌。 

实验原理 

 （一）显微镜的构造 

1．显微镜的机械装置 

 （1）镜座和镜臂 它们是显微镜的基本骨架，起稳固和支持显微镜的作用。 

 （2）镜筒 镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。 

 （3）物镜转换器 物镜转换器上可安装 3—4个接物镜，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。 

 （4）载物台 用于安放玻片。载物台中央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。 

 （5）推动器 是移动标本的机械装置。 

 （6）调焦装置 即粗螺旋和细螺旋，是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件。

2．显微镜的光学系统 

 （1）反光镜 由一平面和另一凹面的镜子组成，可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，照明标本。 

 （2）聚光器 在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上，以得到最强的照明，使物象获得明亮清晰的效果。 

 （3）物镜 

     物镜的种类很多，可从不同角度来分类： 

     根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同，可分为： 

     ①干燥系物镜  以空气为介质，如常用的 40×以下的物镜，数值孔径均小于 1。 

     ②油浸系物镜 常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为 90×—100×，数值孔径值NA大于 1。 

     根据物镜放大率的高低，可分为： 

     ①低倍物镜 指 10×以下； 

     ②中倍物镜 指 20×； 

     ③高倍物镜 指 40×—65×； 

     ④油浸物镜 指 90×以上。 

 （4）目镜 目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像映入观察者的眼中。普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成，上端的一块透镜称“接目透镜”，下端的透镜称“聚透镜”。上下透镜之间或在两个透镜的下方，装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”。 

 （二）光学显微镜的成像原理 

    显微镜的放大是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差，影响像质。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好。

实验器材 

     酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢杆菌。 

     0.1%吕氏美蓝染液。 

     显微镜；载玻片；盖玻片；液体石蜡；擦镜液等。 

实验步骤 

 （一）观察前的准备 

1．显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。 

2．将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约 10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。

3．调节光照，将 10×物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止。 

 （二）酵母菌、枯草芽孢杆菌水浸片的制作 

1．在载被片中央加一滴 0.1%美蓝染色液 （生理盐水），液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取培养了 48小时的啤酒酵母（培养了 16小时的枯草芽孢杆菌）少许，放在美蓝染色液（生理盐水）中，使菌体与染色波均匀混合。 

2．取盖玻片一块，小心地盖在液滴上，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 

 （三）低倍镜观察 

    将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 

 （四）高倍镜观察 

    在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结果。 

 （五）油镜观察 

1．先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约 2cm，并将高倍镜转出。 

2．在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 

3．从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。将聚光器升至最高位置并开足光圈，调节照明使视野的亮度合适，用粗调节器将载物台徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。 

4．观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚酒精混合液（乙醚 2份，纯酒精 3份）或二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭 2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。 

5．将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，再将载物台下降至最低，用一个干净手帕将接目镜罩好，以免目镜头沾污灰尘。最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。 

实验结果及讨论 

1．实验结果 

(1) 绘出酵母菌、枯草芽孢杆菌形态图。 

(2) 鉴别酵母菌的死活。 

2．讨论 

    针对实验原理、步骤、现象进行讨论。

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