结核病实验室细菌学诊断研究

    1996年新研制出BactecTB960分枝杆菌全自动快速培养仪功能与BactecTB460相似，但无放射性污染，在专用的7H9培养管中加入含有：RUTHENIUM荧光的底物，当检测标本经前处理接种于该培养管后，如有分枝杆菌存在，其代谢产物激发底物RUTHENIUM产生荧光，经扫描自动显示以生长指数(G1)表示的测定结果。但Bactec仪器价格昂贵，需专门进口厂家的专利液体培养基，费用较高，而难以在普通实验室广泛开展。 

    (2)分枝杆菌L型  是分枝杆菌在药物等因素作用下产生的细胞壁缺陷型，常规涂片、培养通常阴性，是分枝杆菌病迁延不愈、难治、复治的重要原因。分枝杆菌L型在体内诱导、体外诱导均获成功，如应用氨苄西林、环丝氨酸、异烟肼、利福平、乙胺丁醇或甘氨酸加溶菌酶等均已得到成功的诱导。在结核病标本中开展L型检查[如涂片、培养和聚合酶链反应(PCR)]，可显著提高诊断的阳性率，指导临床进行有效化疗。 

    (3)噬菌体生物扩增法  其原理是活的MT可保护菌体内的噬菌体免受噬菌体杀灭剂作用。先将MT与MT噬菌体共同孵育，使噬菌体侵人MT内，再用抗结核药物处理MT，若MT耐药，则细菌能存活，随后加入杀噬菌体药物，位于菌体内部的噬菌体不被杀死。培养后，若有耐药MT存在时会出现噬菌斑。该方法与传统药敏试验方法符合率高，只需3天时间即可直接检测标本，无需特殊仪器，操作简单。 

    (4)噬菌体生物发光法  分枝杆菌噬菌体40或分枝杆菌噬菌体88是在分枝杆菌噬菌体TM4的非必需区插入含虫荧光素酶表达基因Fflux与卡介苗hsp60启动子的融合体。重组噬菌体进入相应的分枝杆菌体内繁殖，同时在hsp60启动子的作用下，Fflux基因表达虫荧光素酶，通过与体外发光系统中的荧光素作用而发光，检测发光的强度即可间接对噬菌体进行定性分析和定量分析，从而检测分枝杆菌活菌数。噬菌体生物发光法对分枝杆菌具有高度的特异性，发光值较高，而对非分枝杆菌的发光值与阴性对照比较差异无显著性；在含抗结核药物的培养基中，噬菌体对耐药株的发光值比对药物敏感株的发光值高。应用该方法检测分枝杆菌和进行药敏试验仅需3天，但不能鉴别致病分枝杆菌与非致病分枝杆菌。 

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