基于特异性抗体的沙门菌病免疫学检测方法

     随着抗体制备技术的不断进步，特别淋巴细胞杂交瘤技术的出现，使得研究人员能够制备出高品质的抗沙门菌菌体或鞭毛抗原的属特异性抗体，用以建立一些快速的检测方法。已建立的沙门菌免疫学检测方法有许多种，大致可分为以酶联免疫吸附试验、免疫荧光试验、放射免疫试验为基础的方法及其他多种以抗体为基础，利用乳胶凝集、免疫传感器、免疫扩散及免疫色谱技术的方法。

    (1)免疫酶技术  在实践中，ELISA作为一种沙门菌检测的高敏感性检测技术，由于其安全性、简便性等方面的优点，使其在临床检验以及科研中被广泛应用。

    文其乙等应用王志亮研制的沙门菌属特异性单抗CB8和de7建立了检测沙门菌的直接ELISA方法，即用被检样品直接包被酶标板，固定后加酶标属特异性单抗，作用一定时间后，加入底物呈色后终止反应。目前已成功地应用于蛋品、鲜奶、肉晶中沙门菌的检测，该方法与传统方法相比，敏感性和特异性均达到理想效果。

    抗原捕获ELISA是用特异性的单克隆抗体包被酶标板，加人待检样品，是样品中的抗原捕获抗体的基础上发展起来的一种新的检测技术。Riad等用此方法对66份牛粪样品进行鼠伤寒沙门菌检测，被检样品中24．2％为阳性，与直接ELISA方法19．7％的阳性检出率相比，更加灵敏。

    目前，国外开发出一种沙门菌自动酶标免疫检测仪，其原理是用酶荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗后，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本，其对沙门菌的检测的结果比较稳定，已先后被美国FDA、AOAC、USDA等部门认可。

    (2)免疫荧光技术  用于快速检测细菌的荧光抗体技术主要有直接法和间接法。直接法是在检测样品上直接滴加已知特异性荧光标记的抗血清，经洗涤后在荧光显微镜下观察结果。间接法是在检样上滴加已知的细菌特异性抗体，作用后经洗涤，再加入荧光标记的第二抗体。

    孙洋等利用吖啶橙标记沙门菌属特异性抗血清，用吖啶橙免疫荧光菌团培养法检测沙门菌，证明该检测方法与枯草杆菌、大肠埃希杆菌等八种杂菌均不形成菌团交叉，与杂菌的浓度比在1：640内均不受干扰，在30h内即可获得结果。缩短了检测时间，而且具有敏感性高、特异性强、简便快速等优点。Cloak等将待检样品吸附于玻璃斜面的一种薄膜上，然后用免疫荧光显微镜进行结果判定，该方法可检测到1*l0³个／ml。

    (3)免疫胶体金技术  免疫金渗滤法是20世纪90年代初期发展起来的以胶体金为标记物的简便、快速的检测方法，它综合了胶体金自身显色、与蛋白质物理吸附而不影响吸附分子的生物活性、性质稳定等一系列优点，以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性使抗原—抗体反应和洗涤在这一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式，迅速完成，简化了操作步骤，缩短了检测的时间。

    曹春梅等利用针对沙门菌09抗原单克隆抗体和胶体金标记亲和纯化的羊抗鼠IgG，建立了一种以微孔滤膜为固相载体，快速检测沙门菌09抗原的斑点免疫金渗滤法。沙门菌点膜，加入单抗，洗涤后再加入胶体金标记的羊抗鼠IgG，阳性结果呈红色圆点，阴性结果无颜色整个检测过程仅需10min。肠炎沙门菌标准菌株测定该方法灵敏度为6X104CFU／点。该方法可检测所有已知含09抗原的沙门菌，而不与其他沙门菌、肠杆菌科其他细菌和常见革兰阳性细菌反应。

    (4)免疫色谱技术  最新的沙门菌免疫学快速检测，利用经特异性抗体敏化的免疫色谱卡片为基础。几滴样品加到卡片上，结果可以直接用肉眼读出。免疫色谱卡片极易操作，且由于不需要特殊设备，很适合小型实验室使用。尽管卡片检测法与·ELISA法一样需要对样品进行增菌处理，但卡片法检测耗时不超过10rain。

(5)乳胶凝集技术  将特异性的抗体包被在乳胶颗粒表面，通过抗体与相应的沙门菌抗原结合，产生肉眼可见的凝集反应。通常此法需获得细菌的纯培养物，再将培养物与致敏乳胶反应。目前FDA认可的产品有Bactigen、Spectate、Microscreen、Serobact等。

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