病毒学实验技术（4）

常用溶液的配制

（一）胰蛋白酶溶液  以汉克斯液配制，其浓度因胰蛋白酶牌号而定。一般说来，Difco牌用0.27％，E·Merk牌用0.75％，新疆生化所产品用0.5％，其它牌号要经试验确定。按量将胰蛋白酶加入汉克斯氏液后，置37℃20分钟使其完全溶解，滤器除菌（不能加温，更不能高压）无菌检查合格后置-20℃保存，用前加适量的3.5％或1.4％ NaHCO₃使其pH为7.6～7.8。此液供消化细胞用。

（二）汉克斯（Hank’s）氏液，亦称亨克氏液；

原液甲一：

NaCl                     160g    

MgSO₄·7H₂O             2g

KC1                      8g      

MgC1₂·6H₂O              2g

按顺序加入到800m1双馏水中，一物溶解后再加另一物。

原液甲二： CaC1₂  2.8g溶于 l00 ml双馏水中。

以上两液混合，加双馏水至1000 ml，加2ml氯仿防腐，保存于5℃。

原液乙一:

N aH₂PO₄·12H₂O          3.04g 

KH₂PO₄                   1.20g

葡萄糖                    20g

按顺序加入到800ml双蒸馏水中。

原液乙二：0.4％酚红液100 ml（0.4％酚红液是将0.4g酚红置乳钵中，边研磨边徐徐滴加入0.1N的NaOH 11.28ml, 酚红应完全溶解，置于100ml量杯中，最后加双蒸馏水达100 ml）。

将酚红液与葡萄糖等混合液混合，加双蒸馏水至1000ml）加入2ml氯仿防腐，保存于5℃。

按下方配成汉克斯氏液，原液甲1份、原液乙1份、双馏水18份，9磅10分钟灭菌，此液在5℃下可保存1个月。

用前以1.4％ NaHCO₃（9磅10分钟灭菌过），无菌操作，校正pH到7.4（根据需要而定），大约每20ml的汉克斯氏液加入0.5ml的碳酸氢钠可达pH7.4，此时颜色应是黄红色。

（三）厄尔（Earle）氏液

原液甲：

NaCl                        68g         

NaHCO₃                    22g

KCl                      4g          

葡萄糖                       10g

NaH₂PO₄·2H₂O             1.4g            

双蒸馏水                     1000ml

原液乙：

CaCl₂                         2g         

MgCl₂·6H₂O                1.7g

双蒸馏水                      500ml

使用时按下方配即成厄尔氏液：原液甲2份、原液乙1份、双馏水17份，滤器过滤，无菌检查合格后，保存5℃下备用。保存期1个月。

（四）供组织培养用的磷酸盐缓冲盐水（简称PBS）：

NaCl                          8g            

Na₂HPO₄                     1.15g

KC1                        0.2g         

KH₂PO₄                      0.2g

CaCl₂                          0.1g          

MgCl₂·6H₂O                 0.1g

双蒸馏水                       1000ml

滤器过滤，此液pH为7.3，保存于5℃。当有沉淀发生时，不能供组织培养用。

下列供其它用途的磷酸盐缓冲液，不能用于组织培养，注意区别。

（1） NaCl                     7.65g     

KH₂PO₄                     0.21g

Na₂HPO₄                    0.724g       

蒸馏水                    1000ml

此液PH为7.2。

（2） NaCl                     8.5g          

NaH₂PO₄·2H₂O              0.22g

Na₂HPO₄                    1.2g         

蒸馏水                    1000ml

（五）乙二胺四乙酸二钠（简称EDTA，C₁₀H₁₄O₆N₂Na₂·2H₂O）溶液

乙二胺四乙酸二钠         0.05g      

Na₂HPO₄                    0.288g

KH₂PO₄                     0.55g

NaCl                    2g      

KCl                         0.05g 

双蒸馏水                250ml

9磅10分钟灭菌，4℃下保存备用，可代替胰蛋白酶溶液来消化传代细胞。

（六）5％乳蛋白水解物  将5g乳蛋白水解物加入双馏水100ml，待其完全溶解后，装瓶，9磅10分钟灭菌，冷后置4℃保存。亦可用汉克斯氏液直接配成0.5％的溶液便于应用，但不宜长时间保存。

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