病毒学实验技术（1）

一、病毒诊断用病料的采集

病毒分离用生物学材料的最理想的采集时期，是在机体尚未产生抗体之前的疾病急性期。

各种病料，例如血液、鼻咽拭子、粪、尿、脓汁、水泡液、皮肤病变、脊髓液和活体穿刺材料以及剖检时采取的组织，均可用于病毒分离。每个具体疾病需要采取什么样的生物标本，可参考有关疾病的叙述，特别是其诊断部分。

有一些总的规则适用于病毒分离用的组织的正确选择。呼吸道疾病在急性期，通常在鼻或咽分泌物排出病毒。在痘病的水泡液中或痂皮内也可发现病毒。许多全身性卡他性疾病具有病毒血症期，易于由血液中分离到病毒。实际上急性发病期间，机体的所有分泌物中都含有病毒。与中枢神经系统有关的疾病较特殊，但也可由血液或病死动物的脑内分离病毒。采取组织标本时一个最为重要的注意事项，就是必须在动物死亡后立即进行——必要时可扑杀濒死动物，就更有利于病毒分离。同时应采取该动物血液作血清学试验,在冰冻前必须先从全血中分离血清，因为溶血标本经常不再能做某些血清学试验。

各种病毒的生物物理学和生物化学特性明显不同。许多病毒对热及酸敏感，故在采集材料时必须特别注意。尤其是必须采取新鲜材料，并立即置-60℃至-70℃下冰冻。此外，在用这些病料接种组织培养物或试验动物分离病毒时，时间尽量要短。如无其他方法，可将组织标本低温冰冻后置-20℃保存，等待取来干冰后再贮藏和送往实验室。将标本放入宽口保温瓶或以泡沫苯乙烯隔热的纸板盒内，再用冰充填，也可达到这一目的。如果没有干冰，则可应用50％甘油；某些病毒在此种溶液中能比其他一些病毒存活更久。将小块组织、粪或粘液装入小瓶内，再向瓶内注满50％甘油，并贮存于6℃。

组织标本应以无菌器械在无菌条件下采取。如果想要了解组织中的病毒分布，则必须应用分开的器械采取每个组织。经常应用紧盖的灭菌旋帽瓶子贮存可疑的组织和液体。如将液体标本瓶放入干冰内，则应紧盖瓶塞，因干冰的气相就是CO₂，CO₂可因改变液体的pH值使不耐酸的病毒灭活。如果瓶盖漏气，则将其放入密封的塑料袋内也可达到目的。

二、包涵体的检查

用狂犬病脑切片的内基氏（Negri）小体或其他包涵体标本片示教。若有狂犬病的病料组织，可用清洁的玻片作触片，干燥后置甲醇中固定，以姬姆萨氏染液染1小时，水洗，干燥，镜检。

通常可用塞勒（Seller）氏染色法检查狂犬病的包涵体。

（一）塞勒氏染液配制

1．先配好1％美兰（即亚甲蓝）的纯甲醇溶液和1％碱性复红（即碱性一品红）的纯甲醇溶液。两液分别置瓶中加塞塞紧后，于冷处可长期保存。

2．用前将两份美兰液与一份复红液混合，即为塞勒氏染液。用前试验，以神经组织间质染成淡红色为妥，若红色过浅酌加复红液，红色过深酌加美兰液。

（二）塞勒氏染色法  将新鲜脑组织触片（触片不干也可以）浸于塞勒氏染液3秒钟，取出，用普通水冲洗，自然干燥后镜检。

（三）结果  狂犬病包涵体在神经组织的胞质中，嗜酸性，呈樱桃红色。嗜碱性组织与细胞核呈深蓝色，神经细胞质呈蓝紫色，间质呈粉红色，神经纤维呈桃红色，神经鞘不着色。

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