秋石斛兰的组织培养

   以秋石斛兰优良种质，利用新芽为外植体，采用独特的培养基进行丛生芽增殖并获得优质种苗，其特征在于该方法包括以下步骤：

1).材料：秋石斛兰优良种质；

 

2).外植体的消毒：取秋石斛兰当年生具5-6个节的嫩芽，去除叶片后，用水冲洗干净后剪成两段，在超净工作台上用70％的酒精浸泡1分钟，再用0.1％升汞溶液灭菌10分钟，无菌水冲洗5次后，用无菌吸水纸吸干，剪取2-3厘米带节的茎段和茎尖，接种到原球茎和丛生芽诱导培养基上；

 

3).原球茎和丛生芽的诱导：诱导培养基为MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸 0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培养基上，在培养温度26±2℃条件下，10天茎尖开始生长，20天左右茎段节上有新芽形成并生长，当6-苄基嘌呤为4-5时新芽基部有原球茎产生，培养基含蔗糖30克/升，pH5.5-5.8，琼脂0.7％；

 

4).丛生芽增殖：将利用茎段和茎尖培养得到的丛生芽，剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基：MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，能诱导原球茎和丛生芽形成，原球茎能在较高的6-苄基嘌呤浓度培养基上增殖，原球茎转入较低6- 苄基嘌呤浓度的培养基时会分化出丛生芽，丛生芽在较低6-苄基嘌呤浓度的培养基上能增殖；

 

5).生根壮苗培养：丛生芽增殖多代后，可将丛生芽切割成单个芽，接种在1/2MS 培养基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，40天能形成株高3-4厘米的完整植株；

 

6).试管苗移栽：试管苗移栽时，在自然光照下炼苗5-10天，将秋石斛兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后凉干，以小塑料盆为栽培容器，以浸泡过的泥炭藓为栽培基质，保持适当通风和足够的湿度，冬季时采用温室种植，温度维持在15℃以上。