pfu及噬菌体滴度测定方法

 

pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法：

测定噬菌体滴度

只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时（即细胞过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序列。

1. 接种ER2738单菌落于5-10 ml LB培养基中，摇床培养至对数中期（OD600 ~0.5）。

2. 细胞生长时，微波炉融化上层琼脂，分成3 ml等份于灭菌试管中，每个噬菌体稀释度一管。保存于45℃备用。

3. 37℃预温LB/IPTG/Xgal平板，每个噬菌体稀释度取一个平板备用。

4. 在LB中准备10倍系列稀释的噬菌体。建议稀释范围：扩增的噬菌体培养物上清：108-1011；未扩增的淘选洗脱物：101-104。每个稀释度换一新鲜吸头，建议使用带滤芯吸头以避免交叉污染。

5. 当菌体培养物达对数中期，分成200 μl等份于微量离心管中，每个噬菌体稀释度一管。

6. 每管加入10 μl不同稀释度的噬菌体，快速震荡混匀，室温温育1-5 min。

7. 将感染细胞加入45℃预温的上层琼脂培养管中，每次一管，快速混匀，立即倾注于37℃预温的LB/IPTG/Xgal平板上。适当倾斜平板将上层琼脂均匀铺开。

8. 待平板冷却5 min后，倒置于37℃培养过夜。

9. 检查平板，计数有~102个噬菌斑的平板上的斑数。然后用此数目乘以稀释因子即得到每10 μl噬菌体的空斑形成单位（pfu）滴度。