确定某一菌落中的细菌数量的方法

 

通常把细菌培养好后，离心，去除培养液，再加入生理盐水重悬细菌。然后测分光光度计OD值，一般用固定的波值（我用波长540nm）。比色杯（口径1cm)内放入一定量的生理盐水（3000ul)，同样的比色杯对照调零。取上面细菌重悬液放入比色杯（3000ul)，测OD值，继续加入细菌液直至测到0.1，记下所用的细菌悬液的总量（比如为100ul）。然后把细菌液连续进行10倍稀释，每个稀释倍数都取100ul辅琼脂平板，培养20h后计数。

（1）计算细菌浓度

比如第6块板（稀释100000倍）的细菌数为100，推算原始菌液的浓度

100X10（只取0.1ml）X100000=100000000/ml

（2）计算OD值与细菌浓度之间的系数

[（3000+100）/100]X系数=100000000

系数=3225806.4（这个系数算出来后是固定的，以后每次都用这个数）

[（3000+100）/100]是比色杯中细菌被稀释的倍数，而这个被稀释的细菌测到的OD值刚好为0.1，那么以后每次你只要将细菌液测其OD值=0.1，计算其所需的菌液的量，即可算出所含的细菌浓度。不用每次都辅板培养。

举例说明：

在某一次你的菌液测其OD=0.1时，所需的量为150ul,

细菌浓度=[（3000+150）/150]X3225806.4=67741934 （CFU/ml）

这一方法，误差不会太大。基本上是在一个数量级的范围内。

 

有两点要注意：

（1）测OD值要准（包括对仪器、比色杯的要求）

（2）如果细菌传代培养较多次、或菌种保存时间长了，系数每隔一段时间要重新测。否则不准。一般1月重辅板培养测一次系数。如果是第一次做，建议做两次以求准确。