用苯酚:氯仿抽提
1. 把样品至置于离心管中,加入等体积的苯酚:氯仿,
2. 混匀,使之成为乳浊状;
3. 12000rpm离心, 5 分钟:
4. 用枪头把水相移到另一离心管中.
5. 加入等体积氯仿并重复2—4
6. 用2/3体积的异丙醇（或2倍无水乙醇）,1/10体积的3M醋酸钠,沉淀10分钟（-20度长时间沉淀可提高产量）
7. 12000rpm离心5分钟,弃液体
8. 70%的乙醇洗盐10分钟，去上清，
9. 重复8一次，再12000rpm离心弃液体.
10. 50度烘干.
11. 去离子水溶解。
LiCl 抽提
1把样品至置于离心管中,加4/5体积10M LiCl
2 室温下静置1分钟
3 12000rpm离心5分钟
4把液体转移到另一离心管中
5.加2/3体积的异丙醇沉淀10分钟
往下的步骤同于上面的8-12
E.coil总DNA的提取
1 将过夜培养的大肠杆菌离心去上清。
2 加500μl水重悬浮，加入500μl 2% SDS, 混合振荡约1min，55℃温育15min，直到溶液的粘度显著下降。
3 加入0.1倍体积的3mol/L醋酸钠（自然pH）。
4 加入150μl中性苯酚，混合振荡均匀后，12000rpm离心5min，移取上清液，弃去白色中间层。
5 用中性苯酚/氯仿重复抽提直至看不见（或非常少）中间层为止，
6 加入1倍体积的异丙醇（或2倍体积的无水乙醇），上下颠倒混合直至出现白色絮状DNA 沉淀团，用吸头挑出DNA沉淀团。
7 用70%乙醇洗涤DNA沉淀团两次。
8 烘干，溶解DNA沉淀。
上一篇：大肠杆菌DNA片段凝胶回收
下一篇：大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
