禽流感病毒检验

禽流感病毒

     (Avian influenza virus，AIV)

自1878年Perroncito首次报道意大利鸡群暴发禽流感至今的一百多年历史中，禽流感呈广泛性传播和全球性分布，世界范围内许多国家和地区均有禽流感暴发和流行的报道，给养禽业造成了很大的经济损失。更为可怕的是由高致病性禽流感病毒(HPAIV)引起的疫病暴发在上世纪九十年代之前共有9次发生，21世纪初的近几年又连续爆发，对世界范围内养鸡业及人类健康造成极大危害。禽流感：具有爆发突然、蔓延迅速、波及面广等特点，人类、猪、家禽、野禽、水禽等均是受害对象。

人流感：我国每年流感病例数为1.2亿至2.4亿例，重症流感病例为60万至100万例，死亡为5万至10万人，因流感而导致的经济损失十分惊人。

 

一、生物学特性

正粘病毒科/甲型流感病毒属。病毒粒子一般为球形，直径为80～120nm，但也常有同样直径的丝状形式，长短不一；外有囊膜，囊膜表面有许多放射状排列的纤突(Spikes)，纤突分两类，一类是棒状，由血凝素(HA)分子的三聚体构成；另一类是蘑菇状，由神经氨酸酶(NA)分子的四聚体构成，两种结构在囊膜上的比例约为HA：NA＝75：20。

透射电镜下呈圆形，其表面有纤突(×60 000)。 核酸型为单股负股RNA，分8节； 8个独立的RNA片段，分别编码PB1，PB2，PA，HA，NP，NA，M1，M2，NS1，NS2等10种蛋白。

培养特性：易在鸡胚以及鸡和猴的肾组织培养中生长；有些毒株也能在家兔、公牛和人的细胞中生长；在组织培养中能引起血球吸附，并常产生病变；大多数毒株能在鸡胚成纤维细胞培养中产生蚀斑；有些毒株在鸡、鸽或人的细胞培养中培养之后，对鸡的毒力减弱。

抵抗力：禽流感病毒对外界因素的抵抗力较弱,56℃ 30min、60℃ 10min、65-70℃ 数min即可灭活病毒。但对低温抵抗力较强，4℃可存活1个多月，在有甘油保护的情况下可保持活力1年以上流感病毒在直射阳光下40至48小时即可失去活性。

 

二、抗原性

一)根据流感病毒的核蛋白(NP)和膜蛋白(MS)抗原性的不同，将其分为A、B、C三个血清型，三型之间的差异可通过琼脂扩散试验或补体结合试验等进行测定。

二)HA和NA是病毒表面的主要糖蛋白；具有种(亚型)的特异性和多变性，在病毒感染过程中起着重要作用;HA决定病毒的致病性，能诱发感染宿主产生具有保护作用的中和抗体，NA诱发的抗体无中和作用,但可减少病毒增殖和改变病程。

 

迄今已知有16种HA和10种NA，根据病毒HA和NA抗原性的差异，又可将其分为不同的亚型。据报道现已发现的流感病毒亚型至少有80多种；其中绝大多数属非致病性或低致病性；高致病性亚型主要是含H5和H7的毒株。基因组极易发生变异：HA的基因的突变率最高，其次为NA基因。

AIV基因组极易发生变异

1、流感病毒基因突变，导致流感病毒发生抗原漂移(antigenic drift) ，因为流感病毒的RNA复制酶缺乏校正阅读能力，导致不同毒力毒株出现。如1983-1984(美国)H5N2，6个月后成为高致病性，禽类病死率为90%；1999-2001(意大利)H7N1，9个月后成为高致病性。

2、基因重组是流感病毒发生抗原转变(antigenic shift)的主要原因。目前，多数人认为抗原转变是以前流行于人和动物流感病毒基因片段重组的结果。(鸭-猪-人-禽)(新亚型出现)

 

三、致病性

引起各种类型的禽流感( Avian influenza ，AI)。高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza, HPAI)又称：真性鸡瘟、欧洲鸡瘟。OIE A类传染病，严重危害养禽业。

禽流感的分类：高致病性、低致病性、无致病性。受禽流感病毒感染后的症状：轻度的呼吸道症状、消化道症状，死亡率较低；较重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高

四、AI的诊断

一) 病毒的分离与鉴定

采取病鸡的呼吸道或窦内渗出物或器官组织,制成悬液，离心沉淀或过滤以去除组织碎屑；无菌悬液0.1～0.2ml尿囊腔接种10～11日龄鸡胚,在35℃中培养48h。取鸡胚的尿囊液,作HA试验和HI试验，以鉴定病毒。

二)血清学试验

可用来证实抗体的存在－－在感染后7d便可被检测出来。用于血清学检查的方法有：① HI试验——检测抗HA抗体。② 双向免疫扩散试验(AGP)——检测抗NP抗体。③ 病毒中和试验④ 神经氨酸酶抑制试验⑤ ELISA(酶联免疫吸附试验).   其他诊断方法：ELISA，PCR等