实验——放线菌形态观察

1 目的                         

 观察放线菌的基本形态特征

 掌握培养放线菌的几种方法 

2 原理

放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

3 材料

3.1 菌种 

灰色链霉菌(Str. griseus),天蓝色链霉菌(Str. coelicolor),细黄链霉菌（Str.microflavus）。

3.2 培养基  

高氏1号培养基。

3.3 器皿  

培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4 流程

4.1插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检→记录绘图

4.2压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加盖玻片→镜检→记录绘图

4.3埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜检→记录绘图

5 步骤 

5.1插片法

5.1.1倒平板

将高氏1号培养基熔化后，倒10~12毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用.   

5.1.2插片

将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或1/3(图5-1)。

5.1.3接种与培养

用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28℃培养3～7天。

5.1.4观察

培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。直接在显微镜下观察。

5.2压印法

5.2.1制备放线菌平板 

同5.1.1。在凝固的高氏1号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。

5.2.2挑取菌落

用灭菌的小刀(或刀片)挑取有单一菌落的培养基一小块，放在洁净的载玻片上。

5.2.3加盖玻片

用镊子取一洁净盖玻片，在火馅上稍微加热（注意：别将盖玻片烤碎），然后把玻片盖放在带菌落的培养基小块上，再用小镊子轻轻压几下，使菌落的部分菌丝体印压在盖玻片上。

5.2.4观察

将印压好的盖玻片放在洁净的载玻片上(菌体朝向载玻片)，然后放置在显微镜下观察。

5.3埋片法

5.3.1倒琼脂平板

将已配制、灭菌的高氏l号琼脂培养基熔化，通过无菌操作倒入灭菌的培养皿底，倒均，将整个培养皿盖住使凝固。一般f=9cm的培养皿约倒入15mL培养基。

5.3.2接种与培养

在已凝固的琼脂平板上用灭菌小刀切开两条小槽，宽度小于1.5cm。把放线菌接种在小槽边上，？盖上已灭菌的盖玻片1-2片(图5-2)，盖好培养盖。将制作好的平板放在28℃恒温箱培养3-4天。

5.3.3观察 

取出培养皿，可以打开皿盖，将培养皿直接置于显微镜下观察；也可以取下盖玻片，将其放在洁净载波片上，？放在显微镜下观察。

6 结果

6.1 观察并绘制放线菌的孢子丝形态，并指明其着生方式。

6.2 绘图和描述自然生长状态下观察到的放线菌形态

6.3 比较不同放线菌形态特征的异同

7 思考

1在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？