实验——物理因素对微生物的影响

1 目的

1.1 观测氧气、温度、紫外线对微生物生长的影响

1.2 认识细菌芽孢对热、紫外线的抗力

2 原理

环境因素包括物理因素、化学因素和生物因素，不良的环境条件使微生物的生长受到抑制，甚至导致菌体的死亡。但是某些微生物产生的芽孢，对恶劣的环境条件有较强的抵抗能力。我们可以通过控制环境条件，使有害微生物的生长繁殖受到抑制，甚至被杀死；而对有益微生物，通过调节理化因素，使其得到良好的生长繁殖或产生有经济价值的代谢产物。

根据微生物对氧气的需求，可把微生物分为好氧菌、厌氧菌和兼性好氧菌。在鉴定细菌时，常以它们的好氧性作为指标。

温度是影响微生物生长的重要因素之一。根据微生物生长的最适温度范围，可分为高温菌、中温菌和低温菌，自然界中绝大部分微生物属于中温菌。

紫外线主要作用于细胞内的DNA，轻则使微生物发生突变，重则造成微生物死亡。紫外线照射的剂量与所用紫外光灯的功率(瓦数)、照射距离和照射时间有关。紫外线透过物质的能力弱，一层黑纸足以挡住紫外线的通过。

3 材料

3.1 菌种

大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粘质沙雷氏菌。

3.2 培养基

肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、麦芽汁葡萄糖培养基、察氏培养基。

3.3 其他物品

培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、紫外线灯、黑纸、试管、接种针、温箱、刮铲、吸管、调温摇床、分光光度计。

（一）物理因素对微生物生长的影响 

1 氧气对微生物生长的影响

1.1 流程

半固体培养基→接种→培养→观察比较→记录结果 

1.2 步骤

1.2.1制备试管培养基

依据培养基配方制作肉膏蛋白胨半固体培养基，灭菌备用。

1.2.2接种与培养

取上述试管7支，用穿刺接种法分别接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和丙酮—丁醇梭菌，每种菌接种2支培养基试管，剩余一支作为空白对照。注意：穿刺接种到上述培养基中时，必须穿刺到管底。在37℃恒温箱中培养48h。

1.2.3观察结果

取出试验样品，观察各菌株在培养基中生长的部位。

2 温度对M的影响

2.1 流程

配培养液→选择温度→接种→培养→观察比较→记录结果 

2.1 配制培养基

配制肉膏蛋白胨培养液试管（标记A）和豆芽汁葡萄糖培养液试管(标记B)，每管装5m1培养液，灭菌备用。

2.2 选择试验温度

取16支A培养液试管和8支B培养液试管，分别标明20℃、28℃、37℃和45℃四种温度，每种温度A培养液4管，B培养液2管。

2.3 接种与培养

A试管分别接入培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌菌液0.1m1，混匀；同样B试管接入培养18—20h的酿酒酵母菌液0.1m1，混匀；每个处理设2个重复，并进行标记。放在标记温度下振荡培养24小时。

2.4 观察结果

根据菌液的混浊度判断大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌生长繁殖的最适温度。

3微生物对高温的抵抗力

3.1 流程

培养液→接种→高温→培养→观察比较→记录结果

3.2 步骤

 3.2.1选取培养基

取8支A培养液试管，按顺序从1到8编号。

3.2.2接种

其中4支(例如1、3、5、7)培养液试管中各接入培养48h的大肠杆菌的菌悬液0.1m1，其余4支(2、4、6、8) 培养液试管中各接入培养48h的枯草芽孢杆菌的菌悬液0.1m1，混匀。

3.2.3 高温水浴

将8支已接种的培养液试管同时放入100℃水浴中，10min后取出1至4号管，再过10min后，取出5至8号管。各管取出后立即用冷水或冷却。

3.2.4 培养

将各管置于其最适温度的培养箱中培养24h。

3.2.5 观察结果

依据菌株生长状况记录结果。以“一”表示不生长，“十’表示生长，并以“十”，“十十”，“十十十”表示不同生长量。

4紫外线对微生物的影响

4.1 流程

倒平板→涂布接种→紫外线处理→培养→观察比较→记录结果

4.2步骤

4.2.1标记培养基

取肉膏蛋白胨培养基平板3个，分别标明大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等试验菌的名称。

4.2.2接种

分别用无菌吸管取培养18—20h的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌菌液0.1m1(或2滴)，加在相应的平板上，再用无菌刮铲涂布均匀。

4.2.3紫外线处理

打开培养皿盖，用无菌黑纸遮盖部分平板，置于预热10一15min后的紫外灯下，紫外线照射20 min左右，取去黑纸，盖上皿盖。

4.2.4培养

在37℃培养箱中培养24h。

4.2.5观察结果

观察菌株分布状况，比较并记录三种菌对紫外线的抵抗能力。