实验--细菌生长曲线的测定

1 目的

1.1 了解细菌生长曲线特点及测定原理

1.2 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 

2 原理

    将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。

    测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。

3 材料

3.1菌种

    大肠杆菌

3.2培养基

   肉膏蛋白胨培养基

3.3 仪器和器具

    721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。

4 流程

    种子液→标记→接种→培养→测定

5 方法  

5.1种子液制备

    取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液中，静止培养18h作种子培养液。

5.2标记编号

    取盛有50mL无菌肉膏蛋白胨培养液的250mL三角瓶11个，分别编号为0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接种培养

    用2mL无菌吸管分别准确吸取2mL种子液加入已编号的11个三角瓶中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出，立即放冰箱中贮存，待培养结束时一同测定OD值。

5.4生长量测定

    将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在0.10.～0.65以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。

6 结果

6.1 将测定的OD值填入下表：

时　间(h)      对照    0    1.5    3    4    6      8    10    12    14      16    20

光密度值（OD600）                                                

6.2 以上述表格中的时间为横坐标，OD600 值为纵坐标，绘制大肠杆菌的生长曲线。

7 思考

1 用本实验方法测定微生物生长曲线，有何优点？

2 若同时用平板计数法测定，所绘出的生长曲线与用比浊法测定绘出的生长曲线有何差异？为什么？