【摘要】  目的 探讨农药残留的快速检测方法 方法 采用快速测定方法—酶抑制法。 结果 通过对5 添加农药的蔬菜测定，其回收率 85%～105%，与气相色谱法的测定结果基本 致。结论 酶抑制法可以用于蔬菜中农药残留的快速测定。

【关键词】  农药残留;酶抑制法;气相色谱法;测定

     目 我国有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的分析方法有气相色谱法、薄层色谱法以及快速测定方法—酶抑制法。气相色谱法虽是国家标准方法，但要求条件较高，必须具备气相色谱仪并配有火焰光度检测器(FPD)或氮磷检测器(NPD），有适合的色谱柱等，需要昂贵的仪器设备；薄层色谱法检测方法繁杂，操作难度较 ；酶抑制法虽然不是国标法，但具有检测快速、设备和试剂简单、成本低等特点，适合水果蔬菜上市前农药残留毒性的检测，受到基层疾病预防控制机构的普遍欢迎。

    1.1   试剂配制   （1) pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与362g磷酸二氢钾，用 1000ml蒸馏水溶解。(2)显色剂4g/L：分别取80mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6 mg碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，置于4℃冰箱中保存。(3)底物21.67g/L：取65mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸水溶解，摇匀后，置4℃冰箱中保存备用。(4)乙酰胆碱酯酶：3.0mg/L用缓冲溶液溶解，摇匀后，置4℃冰箱中保存备用。(5)有机磷标准储备液：将从国家农药质检中心购买的甲氨磷、敌百虫、乐果、克百威和灭 威饵品用丙酮配制成1g/L的溶液。标准使用液临用前配制。

    1.2   使用仪器    CL-F2000残留农药测定仪(上海复淳软件科技发展有限公司)；气相色谱仪：上海天普分析仪器有限公司GC900A高性能气相色谱仪。

    1.3   操作方法   每 样品做平行样，首先在试管中加入有机磷标液后，然后分别加入3.0ml缓冲液，50μl乙酰胆碱酯酶液，100μl显色剂，摇匀后，在37℃放置15min，加入40μl底物；在0.5min内混合均匀，30s后，立即用F2000测定仪进地测定，F2000型快速测定仪记录1min酶抑制率I%，CK为酶活性的大小。

    计算公式：回收率(%)=（I%/I0）×100

    式中I%—(菜 +标)提取后测定的抑制率减去菜的空白抑制率；

    I0%—直接测定加入农药抑制率。

    2.1   条件选择

    2.1.1   酶活性的测定   分别加入20、40、80μl酶，其他试剂为缓冲溶液3ml，显色剂100μl，底物20μl。测定结果可见，1、2、3 min的线性相似。但酶活性随着酶的 量增加而增加。随着时间的变化，酶的活性不断下降。因此，测定的时间应定为 1或 2 min之内。酶量较少时，灵敏度较低，但酶量大时，灵敏度虽高，但变化较快，使反应不稳定，故取中间值50μl的酶量较佳。

    2.1.2   温度、时间、底物与条件的选择   在室温放置与水浴37℃放置酶的活性不同，37℃放置15和20min，酶的活性也不同。实验结果表明，温度过低与时间过长，酶的活性均较低；37℃放置15min反应，酶的活性较高。底物应足够量，否则，反应不够完全。故取40μl底物为佳。

    2.2   标准曲线的测定   将 6种农药1g/L的丙酮标准储备液，用蒸馏水稀释为甲氨磷10mg/L，毒死蜱100mg/L，敌百虫0.1mg/L，乐果100mg/L，克百威1mg/L，灭多威10mg/L。抑制率：甲氨磷为84.55%，毒死蜱为98.45%，敌百虫为94.32 %，乐果为48.43 %，克百威为92.76 %，灭多威为88.85 %。克百威、敌百虫的相关系数可达到0.99，其他几种农药达到0.96～0.9，由此证明本方法可以作为筛选方法，确证还需要经过气相色谱法测定。

    2.3   回收率   在蔬菜中添加农药，用快速测定仪测定，见表1。表1   回收率测定结果由此可见，蔬菜中加标的回收率为85%～105%，能满足实验要求。

    2.4   精密度   按照2.3添加农药标准，用快速测定仪测定。由此可见精密度范围在0.9%～4.3%，满足实验要求。

    2.5   样品测定结果   将加标样用快速检测方法和气相色谱法测定，样品取样量为10.0g。测定结果表明，两种方法测定结果基本一致。

    综上所述，可以得出快速测定法—酶抑制法能够可满足大批样品农药残留的筛选，但对于抑制率超过30%的样品，应及时进行气相色谱的分析，以进一步确定农药的种类和浓度。

    4.1   快速测定法时间   加入底物混匀30s后定时，1min后测定。并保证混匀过程时间一致，一般实验人员都可在30s内操作完毕。

    4.2   温度和时间   酶抑制的温度和时间对酶的活性影响较大，应该严格控制。

    4.3   气相色谱测定   如果有机磷或氨基甲基甲酸酯类品种增加，可适当增加色谱的柱长度。

 

 作者：马爱霞《中华医药杂志》