原理：某些细菌在糖代谢过程中生成丙酮酸，有的甚至进一步被分解为甲酸、乙酸、乳酸等，而不是生成V－P试验中的二乙酰，从而使培养基的pH下降至4.5或以下（V－P试验的培养物pH常在4.5以上），故加入甲基红试剂呈红色。本试验常与V－P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。
培养基：同V－P试验培养基。
甲基红指示剂：0.1g甲基红溶于300ml95％酒精中，再加入蒸馏水200ml。
方法：接种细菌于培养液中， 37℃培养2～7天后，于培养物中加入几滴试剂，变红色者为阳性反应。
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