实验室生物安全级别——生物安全四级

有些危险的外源性病源，具备因气溶胶传播而致实验室感染和导致生命危险疾病的高度个体风险，有关工作应在BSL—4实验室中开展。和BSL—4病源有相近或特定抗原关系的病源，也应在该级别中开展工作，在该级别的连续工作和低级别的工作中得到足够数据的病源除外。实验室成员应在处理特别危险的传染源方面受过特殊和全面的训练，应了解标准和特殊操作中一级和二级遏制的作用、遏制设备、实验室设计性能。实验由在有关病源方面受过训练、并有工作经验的、有资格的科学工作者监督。实验室主任严格控制进入实验室。设施应在独立的建筑物内；或在建筑物的一个控制区内，但和建筑物内的其他区域完全隔离。应制定、实施特殊设施操作手册。

在设施的工作区内，所有工作应限制在三级生物安全柜中；或在二级生物安全柜中，但得使用装备生命支持系统的一体正压防护服。BSL—4实验室经过特殊设计，是一个特殊的工程，可以防止微生物向环境中扩散。

以下的标准和特殊安全操作、设备及设施和BSL—4病源有关。

一、标准微生物操作

1、实验时，由实验室主任决定限制进入实验室。

2、要制定锐器的安全使用规范。

3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。

4、至少每天一次、或有活体洒出时，对工作台面进行消毒。

5、所有废物在释放前，应使用可行的方法消毒，如高压灭菌。

6、实施控制昆虫和龋齿动物的程序(参见附录G)(另发)。

二、特殊操作

l、只有在实验过程中或辅助需要而必须进入设施或独立实验室的实验人员，才能授权进入。患有免疫缺陷或免疫抑制的人，存在被感染的危险。另外，对于感染风险大的人、因感染而会致特殊危险的人，如儿童或孕妇，不准进入实验室或动物房。

监督者对每种情况的估计和决定谁能进入实验室工作负有最终责任。通过安全措施(如锁上门)限制进入实验室。实验室主任、风险控制负责人、设施物理安全负责人控制人员进入。进入前，要告知潜在危险，通知采取适当安全防护以保证安全。授权进入者要执行通知规定，执行现行所有其他进出程序。所有人要作工作日志，记录每次进出日期、时间。应建立实用有效的紧急情况处理程序。

2、当实验室或动物房中有传染源和感染动物时，所有入口处的门上应贴有危险警告标志和常用的生物危险符号，并标明以下信息：有关病源、实验室主任和其他责任人的姓名表、并表明进入该区的所有特别要求(如，必须免疫或戴口罩)。

3、实验室主任有责任确保在涉及BSL—4的微生物工作开展之前，所有人员非常熟练掌握标准微生物操作及技能，熟练掌握特定实验室设施的特殊操作和运行，其中可能包括人致病菌或细胞培养物处理的重要经验，或由实验室主任或其他熟悉于独特的微生物安全操作及技能的、有资格的科研工作者提供的特殊培训课程。

4、实验室人员接受有效的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种。

5、适当时，收集和储存适合于所有实验室人员和其他有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或实验室的功能，应定期收集其他血清样品。决定建立血清学监督程序时，应当考虑能否得到有关病源的抗体测试方法；程序中，收集一段时间后，应进行血清样品的测试，并将测试结果通知参与者。

6、实验室主任应制定、使用生物安全手册。要告诉实验人员特殊风险，实验人员要阅读，并在操作和程序中遵照执行。

7、实验人员及其辅助人员应接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。

8、人员只有通过更衣间和淋浴室进出实验室。每次离开实验室时，淋浴消毒。仅在紧急情况下，使用气塞进出实验室。

9、在外更衣间脱掉并保存日常衣服。所有进入实验室的人员，应有并使用整套实验服，包括内衣、紧身长衬裤和衬衫或连衣裤工作服、鞋子、手套。当离开实验室并进入淋浴区前，在内更衣间脱掉实验服。衣服清洗前高压杀菌。

10、设施中所需用品和物料通过双门高压锅、烟熏消毒舱、或气塞送入。每次使用后，要对这些装置适当消毒。双门高压锅、烟熏消毒舱、或气塞外面的门牢固的关上后，设施内的人员打开里侧的门取出物料。物料送入设施后，门上保险。

11、必须经常对所有污染的锐器采取高度预防措施，包括针头和注射器、玻片、移液管、毛细管和手术刀。

a．针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。

b．注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。

c．适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。

d．打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照地方、州、联邦的规定进行消毒。

12、从三级生物安全柜和BSL-4实验室转移的活的或完整的生物材料应转入不易破碎的、密封的第一级容器中，然后由不易破碎的、密封的第二级容器包裹。通过专用的杀菌浸泡罐、烟熏消毒舱、或气塞转移出设施。

13、除了需要保持活性或完整状态的生物材料外，除非在离开实验室前高压杀菌或消毒，任何材料不得转移出BSL—4实验室。可能被高温或蒸汽毁坏的设备和材料，可通过气体或烟雾的方法在专用气塞或舱中消毒。

14、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源洒出或溅出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备应当进行日常消毒。设备送去维修或保养前应消毒。

15、洒出的传染源需由适当的专业人员、或由经过适当培训且配有装备的处理高浓度传染源的人员进行处理、清洗。在实验室内，制定并公布可能造成溅洒的实验程序。

16、建立一个体系，报告实验事故、暴露、员工长期旷工以及潜在的和实验室相关的疾病的医疗监督。做好并保存书面记录。和报告—监督体系关系重大的是，得到检疫、隔离、和对潜在或已知患实验室相关疾病的人员进行治疗的设施。

17、和所进行的实验工作无关的材料(如，植物、动物和衣服)不允许带入设施。

三、安全设备(第一道屏障)

设施内的所有程序都在三级生物安全柜中进行，或者穿装备生命支持系统的一体的正压个人防护服、在二级生物安全柜中进行。

四、实验室设施(第二道屏障)

BSL—4实验室有两种模型：生物安全柜实验室，所有的病源处理均在三级生物安全柜中进行；防护服实验室，实验人员穿防护服。也可以在同一设施中，两种模型结合。若结合使用，每种模型必须符合该模型的所有要求。

(一)生物安全柜实验室

1、BSL—4实验室为独立的建筑物或建筑物内有明确界线的独立区。设施内的房间作如下安排，至少通过两道门后，才进入有三级生物安全柜的房间(生物安全柜室)。供进出生物安全柜室用的外内更衣间通过淋浴室隔开。不能通过更衣间进入生物安全柜室的材料、用品、设备，可通过设有双门高压锅、浸泡缸、烟熏消毒舱、或通气间的遏制屏障处(用于消毒)进入。

2、实验开始前，每天检查所有的控制参数(如，气流方向)和生命支持系统，保证实验室按照其运转参数运转。

3、生物安全柜室和内更衣间的墙面、地面、天花板建成密封的内壳,以便于烟熏、防止动物和昆虫进出。地板整体密封、覆盖。内壳的内表面耐液体和化学试剂，便于该区域清洁和消毒。有关结构和表面的所有裂缝均密封。进入生物安全柜室和内更衣间的门框尽量小、能密封，便于消毒。生物安全柜室地板上的任何排水管直接通入废液消毒系统中。下水道开口和其他管道含有HEPA过滤器，防止动物。

4、实验台表面一体或密封，防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和用于工作台面及设施消毒的其他化学物质。

5、实验室的操作台开口结构简单，能承受预期的重量并符合使用要求。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于打扫、消毒。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于消毒的非织物。

6、有免接触式或全自动操作的洗手池，洗手池应安装在生物安全柜室和外内更衣间的门附近。

7、若有中央真空系统，生物安全柜室外的区域不需要抽真空。在线的HEPA过滤器应安装在离使用点和供应阀尽可能近的地方。过滤器的安装要便于就地消毒和更换。生物安全柜室的其他液体和气体供应系统，应有防回流装置保护。

8、若有喷水池，应设在实验室外的走道里，自动或脚动操作。喷水池的供水系统和实验室区域的供水系统分开，设防回流保护器。

9、进入实验室的门可自动关闭，并且可锁。

10、任何窗户不会打破，并密封。

11、对于传递出三级生物安全柜和生物安全柜室的需要消毒的物料，备有双门高压锅。向遏制屏障外开口的高压锅必须密封在遏制屏障的墙上。高压锅门自动控制，使得向外的门只有在高压灭菌过程完成后，才能打开。

12、具备通过浸泡缸、烟熏消毒舱消毒、或类似的消毒手段，使得不能在高压锅中消毒的物料和设备，能安全地从三级生物安全柜和生物安全柜室中转出。

13、污染的内更衣间(包括厕所)和生物安全柜室中的洗手池、地面排水管(若使用)、高压舱、其他来源的液流，通过可行的方法消毒(最好是热处理)后，才能排入污水管中。来自淋浴室、无污染厕所的液流，可不经过处理而排入污水管中。用于废液消毒的程序，必须在物理上和生物上均有效。

14、设有明确的非循环的通风系统，平衡系统的供风和排风装置，保证气流方向从小危险区到潜在的大危险区。能对相邻区之间各自的气压／气流方向监视并报警，以指明系统故障。在无污染的更衣间入口处设有适当的气压可视监视装置，表明、证实各生物安全柜室的气压。监视供气和排气装置气流，HVAC控制系统可避免实验室持续正向增压。三级生物安全柜应直接接入排气系统。若三级安全柜和供气系统相连，应避免安全柜正向增压。

15、生物安全柜室、内更衣间、通气间的供气和排气通过HEPA过滤器。在空气入口处进气，从所用空间排气。HEPA过滤器离供应源应尽可能近，以减少可能污染的管道长度。所有HEPA过滤器需要每年测试和确证。HEPA过滤器装置，应适于过滤器取下前就地消毒，或可将过滤器转入密封、不漏气的一级容器中，然后消毒和／或焚毁。HEPA过滤器装置的设计应适于过滤器的安装、起作用。使用预先确证的HEPA过滤器是有利的。排气HEPA过滤器的使用寿命，可以因对供气适当预过滤而延长。

16、BSL—4设施的设计和操作程序必须文件化。设施必须经过测试以确证设计和操作参数在系统运转前已达到要求。因操作经验，会修改操作程序，所以设施必须每年确证。

17、实验室和外部应有适当的通讯系统(如，传声器、传真、计算机)。

(二)、防护服实验室

1、BSL—4实验室为独立的建筑物或建筑物内有明确界线的独立区。设施内的房间作如下安排，通过更农区和消毒区，进入开展有关BSL—4病源工作的房间(防护服实验室)。供进出防护服实验室用的外内更衣间通过淋浴室隔开。在设施内保持一个特殊设计的防护服区，为实验人员提供类似于三级生物安全柜的保护。进入该区的人员，穿一体正压防护服，防护服装备生命支持系统，通过HEPA过滤供应空气。生命支持系统包括充足的呼吸空气压缩罐、报警器、紧急备用呼吸空气罐。通过装于空气密封门上的气塞进入该区。工作人员离开该区前，用消毒剂淋浴对防护服表面消毒。可自动启动应急供电，至少保证排气系统、生命支持系统、报警、灯光、进出控制、和生物安全柜运转。对于周围实验室；防护服内的气压是正的。相对于相邻区域，防护服区内的气压是负的。备有应急光源和通讯系统。防护服实验区、消毒剂淋浴区、气塞的内壳的所有缝隙都密封。

2、实验开始前，每天检查所有的控制参数(如，气流方向、

消毒剂淋浴)和生命支持系统，保证实验室按照其运转参数运转。

3、对于传递出防护服实验室的需要消毒的废料，可使用遏制屏障上的双门高压锅。向防护服实验区外面开的高压锅门，必须密封在防护服实验区的外墙上，门自动控制，使得外面的门只有在高压灭菌过程完成后，才能打开。配备用于消毒的浸泡缸、烟熏消毒舱、或通气气塞，以传入不能通过更衣间进入防护服区的物料、用品、设备。这些装置也可用于不能高压消毒的物料、用品、设备从实验室安全传出。

4、防护服区的墙面、地面、天花板建成密封的内壳，以便于烟熏、防止动物和昆虫(见附G)。内壳的内表面耐液体和化学试剂，便于该区域清洁和消毒。有关结构及表面的所有的裂缝均密封。防护服区地板上的排水管设有存水弯，内有对目标病源显效的化学消毒剂，并和废液消毒系统直接相连。下水道开口和其他管道合有HEPA过滤器。

5、防护服区的内部设施配件，如灯固定器、通气管道、公用管道的安装，应尽量减少水平表面积。

6、实验台表面；体，防水、耐热、耐有机溶剂、耐酸碱和用于工作台面及设备消毒的化学物质。

7、实验室的操作台开口结构简单，能承受预期的重量并符合使用要求。实验台、安全柜以及设备之间的空间应便于清洁、消毒。实验室使用的椅子及其它器具，应覆盖易于消毒的非织物。

8、防护服区设有免接触式或全自动操作的洗手池。应风险评估要求，外内更衣间应有洗手池。

9、若有中央真空系统，防护服区外的区域不需要抽真空。在线的HEPA过滤器应安装在离使用点和供应阀尽可能近的地方。过滤器的安装要便于就地消毒和更换。防护服区其他液体和气体供应系统，应有防回流装置。

10、进入实验室的门可自动关闭，并且可锁。消毒剂淋浴室的内外门和气塞的内外门互锁，防止两房间的门同时打开。

11、任何窗户不会打破，并密封。

12、洗手池、地面排水管(若使用)、高压舱、和遏制屏障内其他来源的液流，通过可行的方法消毒(最好是热处理)后，才能排入污水管中。来自淋浴室、厕所的液流，可不经过处理而排入污水管中。用于废液消毒的程序，必须在物理上和生物上均有效。

13、设有明确的非循环的通风系统，平衡系统的供风和排风装置，保证气流方向从小危险区到潜在的大危险区。建议有备用供气扇，要求有备用排气扇。能对相邻区之间各自的气压／气流方向监视并报警，以指明系统故障。在无污染的更衣间入口处设有适当的气压可视监视装置，表明、证实各防护服区的气压。监视供气和排气装置气流，HVAC控制系统可以避免实验室持续正向增压。

14、防护服区、消毒淋浴间、消毒气塞的供气通过HEPA过滤器。来自防护服区、消毒淋浴间、消毒气塞的普通房间排气，通过两个排列的HEPA过滤器处理，然后向外释放。在空气入口处进气，从所用空间排气。HEPA过滤器离供应源应尽可能近，以减少可能污染的管道长度。所有HEPA过滤器需要每年测试和确证。HEPA过滤器装置，应适于过滤器取下前就地消毒，或可将过滤器转入密封、不漏气的一级容器中，然后消毒和／或焚毁。HEPA过滤器装置的设计应适于过滤器的安装、起作用。使用预先确证的HEPA过滤器是有利的。排气HEPA过滤器的使用寿命，可以因对供气适当预过滤而延长。

15、供气和排气点的布置，应当以减少防护服房间内通气空间死角为原则。

16、在穿正压防护服工作人员工作的设施内，经过处理的、来自二级生物安全柜的空气，可以释放到房间中或通过设施的排气系统向外排放。若通过设施排气系统向外排放处理后的空气，在和排气系统连接时，应考虑避免干扰生物安全柜或设施排气系统的空气平衡。

17、BSL—4设施的设计和操作程序必须文件化。设施必须经过测试以确证设计和操作参数在系统运转前已达到要求。因操作经验，会修改操作程序，所以设施必须每年确证。

18、实验室和外部应有适当的通讯系统。