用细菌内毒素检查测定注射用对氨基水杨酸钠的热原

 注射用对氨基水杨酸钠为抗结核药。现有标准［1］采用家兔法进行热原检查，本文采用细菌内毒素检查法，通过干扰实验，建立了其细菌内毒素限量检查的方法。现报道如下。

 

    1  材料

 

    鲎试剂（TAL，福州东方鲎试剂厂，批号：011225，规格：λ=0.5Eu/ml并经复核符合规定）；细菌内毒素工作标准品（福州东方鲎试剂厂，批号：011225）；注射用对氨基水杨酸钠（哈尔滨制药总厂，批号：B020401，BO20601，BO20926，规格：2g,经热原测定均符合规定）。电热恒温水浴箱：上海医疗器械五厂。旋涡混合器：上海亚荣生化仪器厂。

 

    2  方法与结果

 

    2.1  细菌内毒素限值（L）的计算［2，3］  药典的热原检查（RT）方法是：取本品，加灭菌注射用水制成20mg/ml的溶液，剂量按家兔体重每1kg注射10ml，即剂量为200mg/kg，人体静脉注射致热阈值（K）=5.0Eu/kg，则L=K/M=0.025Eu/mg［2］。

 

    2.2  最大有效稀释倍数的确定  将本品用BET水稀释成20mg/ml的溶液，其细菌内毒素不得超过0.025×20=0.5Eu/ml，则应用灵敏度（λ）0.5、0.25、0.125、0.06的鲎试剂，选择的稀释倍数分别为：1倍、2倍、4倍、8倍。

 

    2.3  干扰实验的预实验  取一批RT检查合格的供试品，用BET水将其配成20mg/ml的溶液，再做2倍、4倍、8倍稀释。用原液及稀释液来溶解并稀释细菌内毒素工作标准品，使内毒素含量均为1.0Eu/ml，与鲎试剂反应（λ=0.5Eu/ml），并做阴性对照，每一浓度做2管，结果本品对细菌内毒素检查未见抑制作用。

 

    2.4  干扰实验  取3批RT检查合格的供试品，用BET水配制成20mg/ml的溶液，用此溶液和BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成1.0、0.5、0.25、0.125Eu/ml的溶液，与鲎试剂反应（λ=0.5Eu/ml），每个浓度做4管，结果见表1。从表1的结果看，鲎试剂在ET水和3个批号供试品中的λ值为0.25～0.5Eu/ml，均在0.5～2.0λ范围内，符合中国药典对细菌内毒素检查有效性的规定。

 

    2.5  细菌内毒素检查实验  根据干扰实验的结果，选用λ为0.5Eu/ml的鲎试剂进行实验。取3批RT检查合格的供试品，用BET水配制成20mg/ml的溶液依细菌内毒素检查法［1］检查，结果见表2。从表2的结果看，供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品阳性管和阳性对照管均呈阳性，实验结果成立，3个批号供试品的细菌内毒素均符合规定，与RT法结果一致。

 

    表1  注射用对氨基水杨酸钠干扰试验结果（略）

    表2  注射对氨基水杨酸钠的细菌内毒素检查结果（略）

    3  小结

 

    实验结果表明，本品对鲎试剂的凝集反应无干扰作用，用细菌内毒素检查法来代替家兔法对注射用对氨基水杨酸钠进行质量控制是可行的，方法是将样品用BET水配制成20mg/ml的溶液，与灵敏度为0.5Eu/ml或灵敏度更高的鲎试剂反应，结果稳定、可靠。

 

作者：朱万政 张美丽  中华医药杂志 2004年3月 第4卷 第3期

 

    参考文献

    1  中国药典.二部.2000版，附录.

    2  夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.药物分析杂志，1995，15（30）：54.

    3  黄清泉，夏振民.药品的细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32（2）：72.