黄连多糖抑菌活性初探

【摘要】  　　目的探讨黄连多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法用扩散法研究黄连多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用，并选用黄连水提液和盐酸小檗碱作为对照。结果黄连水提液和小檗碱对菌体均有抑菌效果，黄连水提液的抑菌效果尤为明显；黄连多糖没有抑菌作用。结论黄连多糖在体外条件下，不具有对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。

【关键词】  黄连多糖； 小檗碱； 水提液； 抑菌作用

　　Abstract：ObjectiveTo research the in vitro growth inhibitory effect of Coptis chinensis polysaccharide, berberine and aqueous extract solution on Escherichia coli and stap hylococcus aureus. MethodsDispersion method was used to observed the inhibitory effect of aqueous extract solution on Escherichia coli, stap hylococcus aureus withberberine and Coptis chinensis polysaccharide as the compared samples.ResultsThe aqueous extract solution and berberine had effect of growth inhibition on bacteria, and the antibacterial effect of aqueous extract solution was very obvious; Coptis chinensis polysaccharide did not have the effect of growth inhibition on bacteria. ConclusionCoptis chinensis polysaccharide may not have the effect of growth inhibition on Escherichia coli, stap hylococcus aureus.

　　Key words：Coptis chinensis polysaccharide；  Berberine；  Aqueous extract solution；  Antibacterial effect

　　黄连是传统的抗菌、消炎中药，性寒，内服外用皆具有明显的抗菌消炎功效［1］。黄连小檗碱已被证实具有抑菌活性［2］，而黄连多糖是否具有抑菌效果，目前尚未见文献报道。已有资料显示，黄精多糖、黄芪多糖、香菇多糖等许多中药多糖均具有抑菌活性［3～5］，故本研究小组首次对黄连多糖进行研究。实验选用黄连水提液和盐酸小檗碱作为对照品，利用溶液在琼脂培养基内扩散的原理，采用扩散法对黄连除蛋白多糖、黄连未除蛋白多糖的体外抑菌效果进行研究。

　　1  材料与仪器

　　1.1  材料 黄连Coptis chinensis Franch.，产地峨眉，采收于2006年冬至前后，经西南交大药学院生药学教授王盛民鉴定为4年生味连。盐酸小檗碱药片，成都锦华药业有限责任公司产品，批号070820。实验提取用水为超纯水（18.24MΩ×CM-1）。菌种，大肠杆菌Escherichia coli，金黄色葡萄球菌stap hylococcus aureus。培养基，牛肉膏固体培养基。

　　1.2  仪器 FA1004-53423电子天平(0.000 1 g)，上海精科产品； DZF-6030B真空干燥箱，上海齐欣产品；KL-UP超纯水器，成都优普产品；JJ-1A60W数显电动搅拌器，江苏富华产品。BCM-1000A超净工作台，苏州华宇净化设备有限公司产品；YXQ-LS-18SI手提式压力蒸气灭菌锅，上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品；SKP-01B电热恒温培养箱，湖北黄石恒丰医疗器械有限公司产品。

　　2  方法

　　2.1  黄连多糖溶液的制备

　　2.1.1  提取 称取粉碎至20目的黄连粗粉两份，每份60 g，分别置于索氏提取器中用5倍无水乙醇回流脱脂6 h。滤渣挥干后，分别加入10倍水，80℃水浴回流提取1 h。提取液调pH值至中性，抽滤，各旋蒸浓缩至125 ml。

　　2.1.2  除蛋白 将其中一份加木瓜酶0.06 g，40℃水浴1 h，Sevag法4次。(Sevag法：即，提取液∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1，电动搅拌20 min，静置分层后弃蛋白质沉淀及有机层。)

　　2.1.3  醇沉 将提取液的醇浓度调至80%，在冰箱中4℃静置12 h后取出。将醇沉液以5 000 r/min离心5 min，将沉淀用无水乙醇洗涤3次，真空干燥即得灰白色粉末状的黄连多糖。

　　2.1.4  溶液的制备 黄连多糖分为除蛋白黄连多糖和未除蛋白黄连多糖。分别加水配制成5 mg/ml即为高浓度溶液，稀释10倍为中浓度，再稀释10倍为低浓度。

　　2.2  小檗碱溶液的制备 将小檗碱药片研磨成粉，加水配成小檗碱溶液。5 mg/ml为高浓度，稀释10倍为中浓度，再稀释10倍为低浓度。

　　2.3  黄连水提液的制备 将粉碎至20目的黄连粗粉加入10倍重量的水，浸泡1 h，再80℃水浴加热2 h，然后浓缩至1/10体积，即配成了高浓度的黄连水提液，稀释10倍为中浓度，再稀释10倍为低浓度。

　　2.4  菌液的制备 将大肠杆菌，金黄色葡萄球菌分别接种于固体肉汤培养基中，37℃培养24 h，然后在无菌条件下用无菌生理盐水洗涤菌体，混合菌体制备菌悬液。

　2.5  抑菌实验 在无菌操作条件下，将牛肉膏固体培养基熔化冷却至45～55℃，加入适量的菌悬液，混匀，吸取40 ml于平皿内，待凝固后，在平板内挖取直径8 mm圆形小坑，将不同浓度的除蛋白黄连多糖溶液、未除蛋白黄连多糖溶液、小檗碱溶液、黄连水提液注入小坑中，37℃培养24 h，观察并测量抑菌圈直径。各溶液在平皿中注入的位置和顺序如图1。

　　3  结果

　　3.1  抑菌效果的比较 各样品对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用见图2～5。

　　3.2  抑菌圈直径的比较 黄连水提液，小檗碱溶液对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径比较见表1。

　　图1  各溶液在平皿中注入的位置和顺序（略）

　　图2  高浓度溶液对大肠杆菌的抑制效果（略）   

　　图3  中浓度溶液对大肠杆菌的抑制效果（略）

　　图4  高浓度溶液对金葡菌的抑制效果（略）  

　　图5  中浓度溶液对金葡菌的抑制效果（略）

　　表1  黄连水提液和小檗碱对菌体抑菌圈直径平均值（略）

　　3.3  结果 根据图片效果和表中数据可以看出，黄连水提液和小檗碱对菌体均有抑菌效果，黄连水提液的抑菌效果尤为明显；黄连多糖没有抑菌作用。

　　4  讨论

　　黄连本身具有清热燥湿、泻火解毒、清心明目等功效，相关研究证明其有抑菌作用。本实验研究结果也证实了黄连水提液的高浓度溶液和中浓度溶液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用，并显示出抑菌的效果随着浓度升高而增强。盐酸小檗碱对细菌的抑制作用也得到了证实。对于黄连多糖，从本实验的结果看，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌不具备抑制作用，黄连多糖对其它微生物的抑菌效果有待进一步研究。

本研究对目前使用比较普遍的抑菌实验方法、纸片扩散法［6］进行了改进。由于滤纸片所能够承载的药液量很少，而中药成分在体外的抑菌作用普遍较弱，因此我们采取在平板内挖取圆形小坑，然后注入药液的方式来代替纸片扩散法。改进之处在于圆形小坑能够承载的药液量更多，并且能够使药液与培养基接触的更加充分，从而能更加直观准确地反映药液的抑菌效果。实验结果表明，各样品抑菌效果区别非常明显，该方法用于中药提取物的抑菌实验效果较好。

作者：姜延伟 王懿萍 吴玉娟 洪鹏举 许伦杰《时珍国医国药》

【参考文献】

  　　［1］ 王桂红.黄连与药物配伍对抑菌作用影响的研究［J］.中医药学刊，2001，19（4）：400.

　　［2］ 吕 霞，王 晶，蒋文强，等.黄连的研究进展［J］.山东医药工业，2003，22(6)：33.

　　［3］ 苏 伟，赵 利，刘建涛，等.黄精多糖抑菌及抗氧化性研究［J］.食品科学，2007，28(8)：55.

　　［4］ 李树鹏，郝艳霜，陈福星，等.黄芪多糖和2株益生菌体外抑菌作用研究［J］.河南农业科学，2007，4:86.

　　［5］ 钟耀广，林 楠，王淑琴，等.香菇多糖的抗氧化性能与抑菌作用研究［J］.食品科技，2007，4：141.

［6］ 吴 静，王克霞，李朝品，等.黄连与盐酸小檗碱对幽门螺杆菌的体外抗菌活性［J］.中药药理与临床，2006，22(2)：37.

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