川产习用金银花的抑菌作用研究

【摘要】  　　目的 探讨川产习用金银花的抑菌作用。方法平板打孔法。结果川产习用金银花在体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏志贺菌、卡他球菌有比较明显的抑制作用，对溶血性链球菌和鼠伤寒沙门菌不太敏感。结论为川产习用金银花的利用和深入研究提供了科学参考。　

【关键词】  川产习用品种；金银花；体外抑菌; 平板打孔法

　　Abstract:ObjectiveTo research the antibacterial activity of  varieties of Flos Lonicerae produced in Sichuan.MethodsBeating holes method.ResultsVarieties of Flos Lonicerae had obvious antibacterial activity for the bacterium of Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Shigella flexneri and Branhamella catarrhlis，and hadn't obvious antibacterial activity for the bacterium of Staphylococcus haemolyticus, Salmonella typhimurium.ConclusionThe results provide some references for the utility and further study of varieties of Flos Lonicerae  produced in Sichuan.

　　Key words:Variety  produced in Sichuan；  Flos Lonicerae；  Antibacterial activity in vitro;  Beating holes method

　　金银花Flos Lonicerae为常用中药，具有清热解毒、通经活血、疏风散热之功效。2005年版《中国药典》规定金银花为忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或初开的花［1］，但我国作为中药金银花流通及使用的品种却是复杂的［2］。四川地处西南，为我国金银花主要产区之一，品种比较复杂。为了客观评价其品质，我们测定了川产金银花主要有效成分绿原酸的含量［3］。本实验以道地正品金银花河南密县“密银花”作对照，用平板打孔法对川产金银花品种细毡毛忍冬L.similis var.similis，淡红忍冬L.acuminata，红腺忍冬L.hypoglauca，峨嵋忍冬L.similis var.omeiensis进行了体外抑菌作用研究。

　　1  材料

　　1.1  药物川产习用金银花细毡毛忍冬、淡红忍冬、红腺忍冬、峨嵋忍冬经成都中医药大学万德光教授鉴定，“密银花”委托河南中医学院曹继华教授采集鉴定。

　　1.2  菌种金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、溶血性链球菌（Staphylococcus haemolyticus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、福氏志贺菌（Shigella flexneri）、鼠伤寒沙门菌（Salmonella typhimurium）、肺炎球菌（pneumonococcus）由四川卫生干部学院微生物教研室提供；卡他球菌（Branhamella catarrhlis）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）由成都中医药大学微生物教研室提供。

　　1.3  试剂琼脂粉和蛋白胨（购自广州海洋生物有限公司）、牛肉浸出粉（购自灵武市泰运生化制品有限公司）、脱纤维兔血（自制）、分析纯氯化钠等。

　　2  方法

　　2.1  培养基的制备

　　2.1.1  营养肉汤培养基［4］取蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、蒸馏水，按《中国药典》规定比例混合，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，在115℃灭菌30 min。

2.1.2  营养琼脂培养基［4］照上述营养肉汤培养基的处方及制法，按《中国药典》规定比例加入适量琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，在115℃灭菌30 min。

　　2.1.3  血琼脂培养基［5］将营养琼脂培养基加热溶化，待冷至50℃左右，以无菌操作加入10%无菌脱纤维兔血，摇匀，置冰箱备用。

　　2.2  菌液的制备于实验前将上述保存菌种于相应的琼脂平板上划线，于37℃培养箱内培养48 h，取出，用白金环挑起典型菌落接种营养肉汤管中，为了溶血性链球菌、肺炎球菌的生长，后二者需要在血琼脂培养基中培养，经过37℃下培养24 h，将菌液稀释成1×107 cfu·ml-1，供实验备用。

　　2.3  供试液的制备称取川产习用金银花药材及“密银花”各5 g，分别加蒸馏水适量，煎煮3次，第1次40 min，后两次各30 min，分别合并水煎液，浓缩至6 ml，分别定容于消过毒的10 ml容量瓶中，各得500 mg·ml-1的供试液，冰箱中保存备用。

　　2.4  抑菌实验将溶血性链球菌、肺炎球菌菌液0.1 ml滴在血琼脂培养基上，其它菌液0.1 ml滴在营养琼脂平板上，用无菌L型玻棒涂布均匀。用6 mm直径打孔器打孔，每平板打孔3个，除取孔内琼脂，并向每孔内加药液约0.1 ml，放置37℃培养箱内培养18～24 h，观察并记录抑菌环直径。结果见表1。表1  抑菌实验结果（略）

　　3  小结

参照《微生物和检验技术》判定结果［6］，抑菌圈直径≥20 mm为高敏；抑菌圈直径为10～19 mm为中敏；抑菌圈直径<10 mm为钝敏。可见川产4种习用金银花对金黄色葡萄球菌高敏，而“密银花”对其为中敏；5种金银花对溶血性链球菌和鼠伤寒沙门菌基本都为钝敏（抑菌环直径没有大于10 mm）；肺炎球菌对峨嵋忍冬高敏，对细毡毛忍冬和红腺忍冬中敏，对淡红忍冬和“密银花”钝敏；卡他球菌对红腺忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它3种金银花中敏；表皮葡萄球菌对峨嵋忍冬高敏，对细毡毛忍冬和淡红忍冬中敏，对红腺忍冬和“密银花”钝敏；大肠杆菌对细毡毛忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它3种金银花中敏；福氏志贺菌对细毡毛忍冬、淡红忍冬和峨嵋忍冬高敏，对其它两种金银花中敏。

作者：苟占平，万德光《时珍国医国药》

【参考文献】

  　［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：152.

　　［2］徐炳声.中药金银花原植物的研究［J］.药学学报，1979，14（1）：23.

　　［3］苟占平，万德光.HPLC法测定5种1变种金银花中绿原酸含量［J］.中国中医药信息杂志，2004，11（5）：421.

　　［4］国家药典委员会.中国药典,Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录83.

　　［5］王彩玉. 常用细菌培养基制备及注意事项［J］.卫生职业教育，2004，23（12）：102.

［6］杨建江，韩文瑜，杜 锐，等.30种中草药对耐药性猪链球菌的抑菌试验［J］.中兽医医药杂志，2004，23（2）：14.

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