双歧杆菌及灵芝孢子对胃肠菌群失调的预防

【摘要】  　　目的： 探讨双歧杆菌、赤灵芝孢子及其联合制剂对小鼠胃肠菌群失调的预防作用，为临床用药提供实验依据。方法：用不同剂量双歧杆菌、灵芝孢子粉及其联合制剂灌胃7 d，然后林可霉素连续灌胃7 d，计数直肠成型粪便菌落。结果： （1）各预防组需氧及厌氧菌落数均明显高于菌群失调组（P< 0.01）；（2）双歧高剂量组需氧菌落数较正常对照组差异无显著性（P＞0.05）；（3）灵芝孢子高剂量组厌氧菌落数较正常对照组差异无显著性（P＞0.05）；中、低剂量组需氧菌落数较正常对照组差异无显著性（P＞0.05）；（4）联合制剂高剂量组厌氧菌落数较正常对照组差异无显著性（P＞0.05）。结论： 双歧杆菌、赤灵芝孢子、联合制剂有一定预防菌群失调作用。

【关键词】  胃肠疾病； 细菌，厌氧； 灵芝； 小鼠； 肠道菌群失调； 双歧杆菌； 灵芝孢子

　　［Abstract］ Objective: To investigate the preventive effects of bifidobacterium, Ganoderma lucidium spore and their combination in alteration of intestinal flora of mouse. Methods: Mice were given orally with bifidobacterium, Ganoderma spore or combination of the both for 7 days. Then, intragastric administration was carried out with lincomycin to the mice for other 7 days. The microbe colonies obtained from the rectum shaped stool were counted. Result：1. Colony numbers of aerobian and anaerobian in experimental groups were bigger than those in intestinal flora disorder group （P<0.01）; 2. Aerobian colony numbers in high dosage bifidobacterium group did not differ from that of control group（P>0.05）; 3. Anaerobian colony number in high dosage of G.lucidium spore group did not differ from that of control group（P>0.05）; Aerobian colony numbers in middle and low dosage of G.lucidium spore groups did not differ from that of control group（P>0.05）; 4. Anaerobian colony number in high dosage of combination group did not differ from that of control group（P>0.05）.Conclusion: bifidobacterium,G. lucidium spore and their combination have preventive effects on alteration of intestinal flora in mouse.

　　［Key words］ gastrointestinal diseases; bacteria,anaerobic; ganoderma lucidum; mice; alteration of intestinal flora; bifidobacterium; Ganoderma spore

　　肠道菌群是由种类繁多的大量微生物组成的复杂的生态系统，与宿主的生长、发育、物质代谢和衰老等有密切关系。目前，临床上有许多因素可以导致菌群失调，抗生素的不合理使用就是其中之一。长期大量使用广谱抗生素不仅能抑制或杀死致病菌，而且也能作用于对抗生素敏感的正常菌群［1,2］。目前，微生态制剂在预防治疗急慢性感染性腹泻、抗生素相关性腹泻、肠易激综合征、根除幽门螺旋杆菌辅助治疗等疗效较为肯定［3］。2006年8月～ 2007年6月对双歧杆菌、灵芝孢子及联合制剂预防菌群失调作用效果进行了研究，报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  主要试剂全破壁纯赤灵芝孢子胶囊0.3 g/颗，双歧杆菌胶囊0.3 g/颗，香港盈康科技控股国际有限公司生产。盐酸林可霉素注射液0.6 g（2 ml），福建省福清药业有限公司生产。

　　1.2  实验动物昆明种清洁级小白鼠，体重（20±2）g，由贵州省实验动物中心提供。

　　1.3  实验设备恒温培养温箱，厌氧箱，超净工作台,营养肉汤培养基，MRS培养基。

　　1.４  方法

　　1.4.1  动物分组及给药 

　　取昆明种清洁级小鼠110只，随机分为灵芝预防高、中、低剂量组；双歧预防高、中、低剂量组；联合预防高、中、低剂量组及正常对照组、菌群失调组。每组10只，雌雄各半。药物处理及给药：灵芝预防组给予灵芝孢子粉，用无菌蒸馏水溶解干粉后灌胃，高、中、低剂量组分别为2.5、1.25、0.625 g·ｋｇ-1·d-1。双歧预防组给予双歧杆菌活菌制剂，用无菌蒸馏水溶解干粉后灌胃，高、中、低剂量组分别为7.5、3.75、1.875 g·ｋｇ-1·d-1。联合预防组给予灵芝孢子粉及双歧杆菌活菌制剂，用无菌蒸馏水溶解干粉后灌胃，高、中、低剂量组分别为5、2.5、1.25 g·ｋｇ-1·d-1。连续给药7 d。除正常对照组外，给予其余各组盐酸林可霉素注射液500 mg·ｋｇ-1·d-1,连续灌胃7 d。于停药第15天，分别进行检测。

　　1.4.2  动物处理及标本采集 

　　颈椎脱臼处死小鼠，无菌试管提前称重并编好序号。取直肠成型粪便3份,置无菌试管内封口、称重（总重量减空试管重量即粪便重量）后,每管按10 %稀释度加入适量NS充分混匀,10-1～10-9连续10倍倍比稀释,每稀释度取0.01 ml,依次接种于MRS培养基及肉汤培养基表面，MRS培养基置于厌氧培养箱培养。按细菌活菌计数方法选择10-5、10-6、10-7有氧培养平板,10-6、10-7、10-8厌氧培养平板计数［4］。

　　1.5  统计学处理

　　菌落记数结果取lg对数,以x ±s表示。数据分析采用SPSS11.1统计软件包，配对t检验。

　　2  结果

　　2.1  菌群定量分析结果

　　正常菌群组与菌群失调组菌群定量分析结果见表1。由表１可以看出经盐酸林可霉素灌胃7 d后，菌群失调组需氧及厌氧培养菌落记数均明显少于正常对照组（P＜0.01）。观察发现菌群失调小鼠排稀便，多精神不振，毛发有不同程度黏湿，说明模型小鼠肠道内微生物种群平衡遭到明显破坏,出现菌群失调症。表1  正常对照组与菌群失调组菌群数（略）

　　2.2  灵芝预防组菌群定量检测见表2。由表2 可以看出各剂量预防组不同程度的预防了由林可霉素造成的菌群数量减少（P＜0.01）。但灵芝对需氧菌的预防效果随剂量增大而减小,而对厌氧菌的预防效果随剂量增大而增大，具体原因有待进一步研究。中、低剂量组需氧菌较正常对照组无统计学差异（P＞0.05），高剂量组厌氧菌较正常对照组无统计学差异（P＞0.05），说明服用灵芝孢子能预防菌群失调导致的细菌数量减少。

2.3  双歧杆菌预防组菌群定量检测见表3。由表3 可以看出不同剂量的双歧杆菌制剂不同程度的预防了由林可霉素造成的菌群数量减少（P＜ 0.01）。对需氧菌的预防效果随剂量增加而增大，高剂量组需氧菌较正常组无统计学差异（P＞0.05），说明服用双歧杆菌制剂能预防菌群失调导致的细菌数量减少。表2  灵芝预防组菌群定量检测（略）

　　2.4  联合制剂预防组菌群定量检测见表4。不同剂量的联合制剂不同程度的预防了由林可霉素造成的菌群数量减少（P＜0.01），预防效果随剂量增大而增大。联合高剂量组厌氧菌落数与正常对照组比较差异无显著性（P＞0.05）。表3  双歧杆菌预防组菌群定量检测（略）表4  联合预防组菌群定量检测（略）

3  讨论　　

　　在正常人和动物肠道内各菌群间按一定比例组合，互相制约，互相依存，在质和量上形成一定的生态平衡。若机体的内外环境发生某些变化，导致细菌繁殖显著超过正常值的40%以上，则引起肠道食物的分解紊乱，进而出现肠菌群失调症状，临床上表现为急性或慢性腹泻。保护正常菌群的生态环境，提高机体免疫力能有效的防治菌群失调［1］。灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子，为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质，可以提高小鼠细胞免疫和体液免疫水平，增强巨噬细胞吞噬功能以及体内抗体的产生［5～7］。本实验发现，灵芝孢子能预防由林可霉素造成的菌群数量减少（P＜0.01），但灵芝对需氧菌的预防效果随剂量增大而减小,而对厌氧菌的预防效果随剂量增大而增大。提示，灵芝孢子可能具有一定的预防菌群失调作用。　　

　　肠道微生态平衡的维持还依赖于肠道优势菌双歧杆菌的作用。双歧杆菌是非致病性的、能抵抗胃酸和肠道酶类消化、能附着于小肠上皮并能调节黏膜免疫反应的微生物。双歧杆菌的细胞壁可以粘附于肠黏膜上皮细胞阻止致病菌的入侵，同时通过多种方式抑制有害菌的生长［8］。目前认为双歧杆菌通过代谢产生大量的乳酸和乙酸,降低肠道的pH及Eh值, 改善局部微环境, 促进肠菌群失调的恢复［9］。某些双歧杆菌合成的小分子量亲脂分子具有明显的抗菌活性，可以抑制细菌进入细胞内，甚至杀灭细胞内的细菌［10］。本实验中，双歧杆菌对需氧菌群失调的预防作用随剂量增大而提高，且高剂量预防组需氧菌群数较正常对照组无明显差异（P＞0.05）；对厌氧菌群失调的预防作用未观察到明显剂量依赖关系，提示双歧杆菌可能对肠道需氧菌群失调的预防作用强于对厌氧菌群失调的预防作用。将两药合用发现，无论对需氧菌群和厌氧菌群的菌落数都随剂量增大而增大，联合高剂量组厌氧菌落数与正常组差异无显著性（P＜0.05）。　　

综上所述,本研究证实，赤灵芝孢子和双歧杆菌是一种较为有效的预防菌群失调剂,联合使用效果优于单独使用，但无统计学意义。其在纠正肠道菌群失调过程中的具体疗效及功能成分,需要进一步研究。

作者：龙世棋，左丽，陈阿英，崔冬冰，钟志强《贵阳医学院学报》

【参考文献】

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　　［4］张子康,何光泽.医学微生物学与免疫学实验教程［M］.四川：科学技术出版社,2000：112-113.

　　［5］张伟，曾园山.灵芝孢子的研究进展［J］.中西医结合学报，2004（6）：463-465.

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　　［8］佘金文,李铁钢. 益生菌调节大肠癌术后肠道粘膜免疫功能紊乱的临床研究进展［J］.中国现代医药杂志, 2008（3）:231-235.

　　［9］Servin AL. Antagonistic activities of lactobacilli and bifidobacteria against microbial pathogens［J］. FEMS Microbiol Rev，2004（28）:405-440.

　　［10］梁庆红，王倩，张琳，等. 双歧杆菌对小鼠体液免疫功能的影响［J］.承德医学院学报，2004（2）：100-101.

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