白假丝酵母菌不同菌株对动物致病性的对比性观察

【摘要】  　　目的观察白假丝酵母菌标准菌株（CCCMC1a、ATCC 14053）与临床分离菌株（C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4）对小鼠与家兔的致病情况，并探讨不同菌株对动物致病性与荚膜厚薄的关系。方法小鼠及健康成年家兔按上述菌株不同分为CCCMC1a，ATCC 14053， C1-1，C1-2， C1-3 ，C1-4共6组，每组小鼠20只，家兔12只；将实验菌种沙保氏琼脂36 h培养物用生理盐水配成约含1×109个/ ml的菌悬液，家兔耳缘静脉注射，1～1.5 ml /只；对BALB/c小鼠腹腔注射，0.5 ml /只，于注射后6 h开始密切观察动物的反应，连续观察7 d，记录动物发病情况：发病天数、死亡天数及死亡动物数、动物死亡率、存活动物数等，比较不同菌株对动物的致病性。待实验动物死亡后，分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检，用显微测微计测量荚膜层的厚度，各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值，取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较，并且与菌株的动物致病性相联系，观察是否具有一定的规律性。结果C1-2和C1-4相对于C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053来说，具有很强的动物致病性。标准菌株和临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜，荚膜层的厚度可因不同菌株和不同动物体内形成而有显著差异，P＜0.01或P＜0.05。结果显示，兔肾感染灶的菌细胞较小鼠腹腔内菌细胞的荚膜明显宽厚，C1-1，C1-2， C1-3 ，C1-4组的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜比CCCMC1a，ATCC 14053明显宽厚，其中对动物高致病性的C1-2和 C1-4的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜最为宽厚。结论C1-2和C1-4具有很强的动物致病性，它们的荚膜与其它菌株相比较也更宽厚。荚膜可能是白假丝酵母菌的毒力因子，荚膜的宽厚与动物的致病性有着密切的联系。

【关键词】  白假丝酵母菌 标准菌株 临床菌株 致病性 荚膜

　　Abstract:ObjectiveTo observe the pathogenicity of the standard strain(CCCMCIa  ATCC14053)and the clinical isolation strain (C1-1 C1-2 C1-3 C1-4)of candida albicans in mice and rabbits, and to study the relatiorship between it and the thickness of the capsule.Methods120 BALB/c mice and 72 rabbits were divided equally into six groups. The strains smeared on sabourand ager medium for 36h were diluted into the bacterial solution of 1×109/ml by physiological saline.1ml-1.5ml of this solution was injected in a rabbit's verge vein of ear,and 0.5ml in a mouse abdominal cavity. The animals were observed and recorded for 7d. After the episoded, the animals were dissected and the thickness of capsule was observed by Hiss capsule stain,  and surveyed by microscopic surveying instrument. The thickness of a speciman's average capsule defined by the average thickness of 40 sacccharomycetic cell was compared with the others. ResultsCompared with C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053，C1-2 and C1-4 had strong pathogenicity to animals. Capsular structure's distinct borderline could be seen in the yeast-like cells on the smear from the the standard strain and the clinical isolation strain, infected mouse and rabbit tissues (P<0.01 or P<0.05) . But the formation of the capsule was apparently related to animals and the strain specimen. Results showed that the thickness of the capsule in rabbit was larger than that in mouse.The thickness of the capsule in rabbits and in mouse of C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4 were larger than that of CCCMC1a, ATCC 14053. C1-2 and C1-4 which had high pathogenicity had the largest capsule.ConclusionThe pathogenicity of candida albicans is related to the thickness of the capsule.

　　Key words:Candida albicans;  Standard strain;   Clinical isolation strain ;   Pathogenicity ;  Capsule

　　白假丝酵母菌S. albicans，俗称白色念珠菌Candida albicans，是假丝酵母菌属（Saccharomyces）中最常见的病原菌。新近报告临床标本中分离的真菌以白色念珠菌为主,占45.3%［1］。真菌感染在化疗相关性腹泻中占重要地位［2］，也为AIDS病人并发感染的常见致病菌［3］。过去认为其不具有荚膜［4］。马廉兰等［5，6］从女性性病患者的阴道分泌物中分离到多株菌株具有荚膜结构。有关白假丝酵母菌的致病因素，现认为白假丝酵母菌的芽管及形成的假菌丝是其重要的致病物质［7，8］。荚膜与该菌的毒力是否有关未见报道，本文就白假丝酵母菌不同菌株对动物的致病性及与荚膜的关系作初步的探讨。

　　1  材料与方法

　　设计：以实验动物为观察对象的对照实验。   
　　单位：一所医学院的病原生物学教研室。

　　1.1  材料

　　由中科院真菌菌种保藏中心(南京)提供中央标准菌株（菌号CCCMC1a）；由北大医院真菌菌种保藏中心 (北京)提供国际标准菌株（菌号 ATCC 14053）；由马廉兰课题组从性病门诊病人阴道分泌物中分离培养4株临床菌株，参照 “深部感染真菌及其检验方法”［9］进行鉴定，作出芽试验、玉米琼脂培养、糖发酵试验等初步鉴定，并经中科院真菌菌种保藏中心（南京）鉴定为白假丝酵母菌，暂行自编菌号为：C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4。由中山大学动物实验中心提供BALB/c小鼠120只，雌雄各半，18～22 g，平均(20.0±1.2) g。由赣南医学院动物实验中心提供健康成年家兔72只，2～2.5 kg，平均（2.3±0.25）kg。按上述菌株不同将实验动物随机分为6组：CCCMC1a，ATCC 14053， C1-1，C1-2，C1-3 ，C1-4共6组，每组小鼠20只，家兔12只。

　　1.2  方法

　　将实验菌种沙保氏琼脂36 h培养物用生理盐水配成约含1×109个/ ml的菌悬液，家兔耳缘静脉注射，1 ml/只，同时用BALB/c小鼠腹腔注射，0.5 ml/只；于注射后6 h开始密切观察动物的反应，连续观察7 d，记录动物发病情况：发病天数、死亡天数及死亡动物数、动物死亡率、存活动物数等。荚膜观察：待实验动物死亡后，分别取家兔肾组织印片及小鼠腹腔液涂片进行Hiss荚膜染色镜检，用显微测微计测量荚膜层的厚度，各菌株随机计数40个酵母细胞的荚膜层的厚度值，取各菌株荚膜层厚度的均值进行比较。

2  结果

　　C1-2和C1-4相对于C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053来说，发病天数和死亡天数短，动物死亡率高，具有很强的动物致病性（见表1）。四株临床分离菌株在家兔及小白鼠体内均可形成荚膜，但荚膜层的厚度可因不同动物体内形成而有显著差异（P＜0.01或P＜0.05）。兔肾感染灶的菌细胞较小鼠腹腔内菌细胞的荚膜明显宽厚，C1-1，C1-2， C1-3，C1-4组的兔肾感染灶的菌细胞及鼠腹腔内菌细胞的荚膜比CCCMC1a，ATCC 14053明显宽厚，其中对动物高致病性的C1-2，C1-4的兔鼠菌细胞的荚膜最为宽厚。结果见表2。表1  注射后7 d内动物发病情况（略）表2  实验菌在家兔与小鼠体内荚膜厚度的比较（略）

　　3  讨论

　　某些细菌及真菌具有荚膜，因荚膜可抵抗吞噬细胞的吞噬作用，因此具有荚膜的菌一般毒力较强。马廉兰等［5］从女性性病患者的阴道分泌物中分离到多株白假丝酵母菌菌株具有荚膜结构。该菌株荚膜是否与该菌的假菌丝一样也与毒力有关，是否荚膜越厚毒力越强，本次白假丝酵母菌的动物致病性实验结果与荚膜观察结果初步验证了这一规律。

不同菌株对动物的致病性不同，这与很多因素有关，本文仅就与荚膜的厚度关系进行分析。在对动物的致病性实验中，C1-2组和C1-4组的动物发病天数和死亡天数短，动物死亡数多，因此C1-2和C1-4菌株对动物的致病性相对于C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053菌株来说比较强，而在其后的菌液涂片荚膜观察中，发现对比C1-1，C1-3，CCCMC1a，ATCC 14053菌株的荚膜厚度，C1-2和C1-4菌株的荚膜最为宽厚。这一结果提示，荚膜是该临床分离菌株的毒力成分，荚膜越厚的菌，毒力越强。关于这一规律还需作进一步的探讨。

作者：王小丽，马廉兰，刘志春，钟有添，谢水祥，曹镐禄《时珍国医国药》

【参考文献】
  　［1］许晓文.院内150例真菌感染及耐药性分析［J］.中国微生态学杂志，2005，17（2）：141.
　　［2］姜之馨， 邱立华，王华庆，等.去甲万古霉素改善化疗相关性腹泻患者生活质量的作用［J］.中国临床康复，2003，7（29）：3986.
　　［3］钱利生.人类免疫缺陷病毒［A］.周正任，医学微生物学，第6版［M］.北京：人民卫生出版社, 2003： 323.
　　［4］谭世熹. 白色念珠菌的鉴定［A］. 上海市立医学化验所.实用临床检验［M］.上海：上海科学技术出版社, 1965：689.
　　［5］马廉兰，钟有添，曾祥凤,等.临床分离一株具有荚膜的白假丝酵母菌［J］.中山大学学报（医学科学版）2005，26（4）：封2.
　　［6］马廉兰，谢水祥，曾祥凤.4株具有荚膜的白假丝酵母菌的分离与鉴定［J］.微生物学通报,2006,33(4)：27
　　［7］Rodrigues A G, Mardli P A, Pina-Vaz C, et al. Infect Dis Obstet Gynecol［J］.1999, 7(5)：222.
　　［8］Lanco M T, Blanco J, Sanchez-Benito R, et al. Microbiol［J］.1997, 89(358)：23.
　　［9］吕乃群.深部感染真菌及其检验方法［A］.李影林.中华医学检验全书，下卷，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，1996：1995.

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