葡萄糖氯化钠注射液细菌内毒素检查方法的研究

1　实验材料

　　细菌内毒素国家标准品(批号981，9000 EU/支，中国药品生物制品检定所)，鲎试剂(0.5 EU^．ml^-1，0.1 ml^．支^-1，生产厂：①厦门鲎试剂厂，批号980622。②湛江海洋生物制品厂，批号980417。③湛江安度斯生物有限公司，批号981111)。葡萄糖氯化钠注射液(本院制剂室及唐山吉祥药业生产)，细菌内毒素检查用水(批号97-1S，10 ml^．支^-1，中国药品生物制品检定所)。

2　方法及结果

2.1　鲎试剂灵敏度复核试验　所用鲎试剂均进行灵敏度复核。以细菌内毒素检查用水将细菌内毒素国家标准品稀释成不同浓度，按文献^［1］方法进行操作，观察结果，计算各鲎试剂灵敏度实测值(λc)，结果均符合药典规定。见表1。

表1　三个不同厂生产的鲎试剂灵敏度复核试验结果.

注：λ＝0.5 EU^．ml^-1

2.2　细菌内毒素限值的确定　根据药品细菌内毒素限值L＝K/M^［2］，K为细菌内毒素的致热阈，为5 EU^.kg^-1.h^-1；M为热原检查剂量，葡萄糖氯化钠注射液为10 ml^.kg^-1.h^-1；计算结果L＝0.5 EU^.ml^-1。
2.3　干扰试验最大有效稀释倍数　L值确定后，根据所用鲎试剂的标示灵敏度(λ)确定样品稀释倍数。最大有效稀释倍数MVD＝L/λ，本实验采用λ为0.5 EU^.ml^-1的鲎试剂，因此，葡萄糖氯化钠注射液MVD＝1，即采用原液不必稀释。
2.4　干扰试验　用供试品将细菌内毒素国家标准品稀释成1，0.5，0.25，0.125 EU^.ml^-14个浓度的溶液，采用3个不同厂生产的鲎试剂分别进行干扰试验，具体操作步骤按文献［1］的方法，观察结果并计算λc值，按中国药典规定，若0.5 λ≤λc≤2λ(λ=0.5 EU^.ml^-1)，则证明供试品对BET无干扰。结果见表2。

表2　葡萄糖氯化钠注射液干扰试验

2.5　对照试验　按照文献［1］方法对本院制剂室生产的3批葡萄糖氯化钠注射液进行热原检查，结果均符合规定。将本院制剂室和唐山吉祥药业生产的葡萄糖氯化钠注射液各3批按文献方法^［3］分别进行细菌内毒素检查，见表3。

表3　葡萄糖氯化钠注射液两种细菌内毒素检查方法对照试验结果

注：+—表示阳性结果；-—表示阴性结果

3　讨　论

　　采用3个不同厂家生产的鲎试剂分别进行葡萄糖氯化钠注射液细菌内毒素干扰试验，从表2可以看到，结果基本一致，其中湛江安度斯生产的鲎试剂干扰试验结果与灵敏度复核结果完全相同，测得λ_c值均在不干扰范围之内，故葡萄糖氯化钠注射液的BET采用其中任一厂生产的鲎试剂均可。本实验证实葡萄糖氯化钠注射液对BET无干扰作用，所以，选择λ=0.5 EU^.ml^-1的鲎试剂直接进行BET即可。
　　由表3可知，本院制剂室和唐山吉祥药业生产的葡萄糖氯化钠注射液分别进行细菌内毒素检查，其结果与热原检查结果均一致。因此，葡萄糖氯化钠注射液采用细菌内毒素检查法替代热原检查法是可行的。

作者单位：刘晓红（唐山063000唐山市工人医院）　
　　　　　李治田（唐山063000唐山市工人医院）　
　　　　　王新华（唐山063000唐山市工人医院）

参考文献：

［1］中国药典1995年版.二部.1995：附录76.
［2］黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的试验设计.中国药学杂志，1997，32(2)：72.
［3］中国药典1995年版1998年增补本.1998：142.

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