肉汤保存法用于淋球菌保种的研究及效果观察

摘要：目的寻找一种更为简单、方便且有效的保存淋球菌的方法。方法对分离的3 4株经菌落形态、氧化酶试验及生化反应鉴定为淋球菌的菌株用 肉汤在不同的温度下进行保种 ； 并用本实验室自制的培养基对保存菌株进行定期复苏。结果   采用肉汤保存法，淋球菌在-2 0 ℃至少可保存2个月，-30℃至少可保存 2～3个月， -70℃至少可保存 1年以上；并发现液氮中淋球菌的保存效果最好及保存时间最长 。结论  肉汤保种法可以用于淋球菌的保 存 。 

1 材料与方法

1.1试验主要试剂

氧化酶试剂(盐酸四甲基对苯二胺) ，购自广西皮肤病研究所；糖发酵试剂及淋球菌培养基由实验室自己配制 。 

1.2菌株来源

34株淋球菌标本分离自南昌市各医院门诊就诊患者 。 

1.3肉汤的配制

取250g牛肉(去除脂肪与筋膜) 剁碎，加蒸馏水500 ml 并放人少量的NaOH，然后煮1h ( 若已经在4℃冰箱过夜则煮30 mi n即可) 。过滤除渣，调整容量至500ml，再加入5 g蛋白胨，2.5 g Na C1，调整p H值至 7.4 ～7.6 ，高压灭菌后冷却置 4℃冰箱保存备用。 

1.4菌株的分离与纯化

将尿道或官颈分泌物接种于淋球菌培养基上，36.5℃ 、 5% ～ 10%CO₂ 孵育2 4 h 。挑取染色镜检为革兰阴性球菌、氧化酶试验阳性、糖发酵试验只能够分解葡萄糖的菌落进行纯培养。 

1.5 菌种的保存

将纯培养2 4 h后的淋球菌菌落用接种环刮下，洗入已经预温的肉汤管中(菌浓度约为1×10⁸) ，每个标本分别收集4管后分别置-20℃、-30℃、-70℃冰箱以及液氮中保存。 

1.6 菌种的定期复苏

将保存于上述温度中的菌株进行定期复苏。复苏时间为保存第7天、 第1 5天、第30天、第 2个月、第 3个月 、第 6个月以及第1 2个月， 复苏结果以长出肉眼可见的淋球菌菌落为标准。 

2   结 果

复苏结果见附表 。 

附表 134株淋球菌不同保存温度下保存不同时间后的存活率

 

3   讨 论

目前淋球菌最理想的保种方法为冷冻真空干燥法，但该方法需真空泵设备且操作相对复杂。本方法与巧克力液体培养基保种法和脱脂牛奶保种法相似 ，并发现肉汤保存法在相同的条件下对淋球菌的保存效果与文献报道的脱脂牛奶保存法无明显差异。对于细菌实验室 而言，本保种方法所使用的材料来源更加方便，并且肉汤的透明度高，有利于对细菌的浓度进行观察 ，但本方法保种过程中需要注意调节肉汤的pH值 ，否则容易影响细菌的活力 。