实验室技术——对可能含有朊蛋白物质的防护

   朊蛋白（prion，也称作为“慢病毒”）与许多疾病相关，包括某些传染性海绵状脑病（transmissible spongiform encephalopathies，TSEs）、克雅病（Creutzfeldt-Jakob disease，CJD；包括新的变异型）、格-施-沙综合征（Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome）、人类致死性家族性失眠症和库鲁病、绵羊和山羊的瘙痒病、家畜的牛海绵状脑病（bovine spongiform encephalopathy，BSE），以及鹿、糜鹿及貂的传染性脑病。尽管克雅病已经传播到了人类，但是还没有证据证实发生过由这些病原体所引起的实验室感染。不过，在操作已感染或潜在感染的人或动物材料时，还是应当谨慎注意防护。
　　当进行与传染性海绵状脑病有关材料的工作时，应根据微生物因子和所研究标本的特征来选择生物安全水平，并向国内权威机构咨询后进行。在中枢神经系统组织中发现有最高浓度的朊蛋白，动物研究还表明在脾脏、胸腺、淋巴结和肺内可能也有高浓度的朊蛋白。最近的研究表明，舌和骨骼肌组织也存在潜在朊蛋白感染的危险[21-24]。
　　由于很难彻底灭活朊蛋白，因此尽可能地使用一次性器具，在生物安全柜的工作台面使用一次性防护罩，这些措施都非常重要。
　　主要应该预防的是避免污染材料的食入或实验室工作人员的皮肤刺伤。由于朊蛋白不能被普通的实验室消毒和灭菌方法所灭活，故应当遵循以下防护措施：
　　1、强烈建议使用专用仪器设备，亦即不与其他实验室共用仪器。
　　2、必须穿戴一次性防护服（隔离衣和围裙）和手套（对病理学家而言，要在两层橡胶手套间戴钢丝网手套）。
　　3、强烈建议使用一次性塑料制品，它们可按干废弃物处理并丢弃。
　　4、由于灭菌的问题不能使用组织处理机（tissue processors），应当使用广口瓶或烧杯（塑料材质）替代。
　　5、所有操作必须在生物安全柜中进行。
　　6、必须特别小心以避免产生气溶胶、意外食入、划伤或刺伤皮肤。
　　7、福尔马林固定的组织，即使在长时间福尔马林的浸泡后，仍应视作具有感染性。
　　8、含有朊蛋白的组织标本暴露于96%甲酸1 h可以基本失活[24, 25]。
　　9、实验台垃圾，包括一次性手套、隔离衣和围裙，均应当采用多孔负荷蒸汽灭菌器在134～137℃高压灭菌18 min一个循环，或高压灭菌3 min六个循环，然后再焚烧。
　　10、钢丝网手套或Kevlar手套等非一次性用具，均必须收集起来清除污染。
　　11、污染有朊蛋白的感染性废液应当用含20g/L（2%）有效氯的次氯酸钠（终浓度）处理1 h。
　　12、多聚甲醛熏蒸的方法不能降低朊蛋白的滴度，朊蛋白对紫外线照射也具有抵抗力。但是，安全柜仍必须用标准方法来清除污染（如甲醛蒸气），以灭活可能存在的其他微生物因子。
　　13、朊蛋白污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L（2%）有效氯的次氯酸钠处理1 h来清除污染。
　　14、HEPA过滤器摘除后需要在至少1000℃的温度下焚烧。在焚烧之前推荐进行下述处理：
a. 在摘除前用喷漆喷头给过滤器的裸露表面喷雾，
b. 在摘除过程中将过滤器“装袋”，以及
c. 从工作柜中除去HEPA过滤器，这样可以不污染难以操作的安全柜压力排风系统。
　　15、用具应当用含20g/L（2%）有效氯的次氯酸钠浸泡1 h，然后用水彻底清洗再进行高压灭菌。
　　16、不能高压灭菌的用具可以反复用含20g/L（2%）有效氯的次氯酸钠润湿超过1h来进行清洁，并要求用水冲洗以清除残留的次氯酸钠。

 

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