3．3％盐酸酒精；
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布。菌落涂片时，先取生理盐水 1滴，置玻片上，用接种针挑取菌落，在盐水中涂布。涂片时必须注意应轻轻操作。猛烈的动作会改变菌细胞原有的排列形式，或造成细菌鞭毛脱落，影响结果的准确性。制备的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细胞形态改变。将固定后的涂片进行染色。
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性(紫色)和革兰阴性(红色)两类。
试剂
1. 结晶紫溶液
A液： 结晶紫 2g
95％乙醇 20ml
B液： 草酸铵 0.8g
蒸馏水 80ml
需在用前24h将A液、B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2．碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
碘与碘化钾混合并研磨，加入几毫升水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3．脱色液：95％乙醇。
4．复染液
A. 贮存液： 沙黄 2.5g
95％乙醇 100ml
B. 应用液： A液 10ml
蒸馏水 90ml
染色方法：
1．涂片经火焰固定，加结晶紫液染1 min，清水冲去染液。
2．加碘液染l min，水洗。
3．加脱色液，不时摇动约10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。
4．加复染液，染30s，水洗。
5．干后镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染厚涂片时，须掌握复染色时间。如果背景过深，影响镜检。
奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，取培养菌落涂片染色时，呈现两种现象，视野中有些菌细胞阳性，另外一些则阴性；有时同一个菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。
抗酸染色有两种常用方法：① 碱性复红法又称萋纳(Ziehl—Neelsen)法。 ② 荧光染料金胺O法(也称金胺O-罗丹明B法)。
(一) 碱性复红染色法
试 剂
1．萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
5％石炭酸溶液 90ml
2．脱色剂 *
浓盐酸 3ml
95％乙醇 97ml
3．复染液(吕弗勒美蓝液)
美蓝乙醇饱和溶液 30ml
10％氢氧化钾 0.1ml
蒸馏水 100ml
染色方法
1．涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。染5 min(若染色奴卡菌需要加长时间)，水洗。
2．加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。
3．加复染液，染0.5～l min，
