农药残留——恶唑菌酮检测方法

1．分析目标化合物
    恶唑菌酮
2、仪器设备
    带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪（HPLC(UV)）
    液相色谱--质谱仪（LC/MS）

3、试剂
    丙酮

    氯化钠溶液

    正己烷

     无水硫酸钠
    乙腈：高效液相色谱用
    甲醇：高效液相色谱用
    恶唑菌酮标准品：含恶唑菌酮98％以上，熔点为140℃～143℃。
4．试验溶液的制备
1） 提取方法
    豆类：称取10.0g样品，加入20mL水，放置2小时。
    水果和蔬菜：称取20.0g样品。
    加入100mL丙酮，均质后，抽滤。滤纸上的残留物中加入50mL丙酮，均质后，按上述同样操作，合并所得的滤液。40℃以下浓缩至约30mL。浓缩液中加入100mL 10％氯化钠溶液，分别用100mL和50mL正己烷振荡提取两次。提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，滤液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入5mL乙醚：正己烷（1：19）混合溶液溶解。
2）净化方法
①硅胶柱色谱法
    在硅胶小柱(690mg)中注入5mL正已烷，舍弃流出液，注入1）所得到的溶液，舍弃流出液。注入10mL乙醚：正己烷（1：19）混合溶液，舍弃流出液。再注入20mL乙醚：正己烷（3：7）混合溶液，溶出液40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中加入2mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液溶解。
②酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
    在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱(500 mg) 中依次注入5mL丙酮：正已烷（1：19）混合溶液和5mL正已烷，舍弃各流出液。注入①所得的溶液，舍弃流出液。再注入8mL丙酮：正已烷（1：19）混合溶液，舍弃流出液。再注入20mL丙酮：正已烷（1：9）混合溶液，流出液40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物中2.5mL甲醇溶解后，再加入2.5mL水。
③ 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法
    在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱((500 mg ) 中依次注入5mL甲醇和5mL水，舍弃各流出液。注入②所得的溶液，舍弃流出液。再注入15 mL水：甲醇（1：1）混合溶液，舍弃流出液。再注入8mL乙腈：水（7：3）混合溶液，溶出液在45℃以下浓缩，除去溶剂。残留物溶解在乙腈：水（1：1）混合溶液中，准确至2mL（豆类为1 mL）作为试验溶液。
5．标准曲线的制作
    用乙腈：水（1：1）混合溶液将恶唑菌酮标准品配制成0.1～2 mg/L的溶液数点，分别注入50 μL于HPLC中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。
6．定量试验
    注入50μL试验溶液于HPLC中，根据5的标准曲线求出恶唑菌酮的含量。
7．测定条件
    HPLC
    检测器：UV（波长230 nm）
    柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm），内径4.6 mm、长150 mm
    柱温：40℃
    流动相：乙腈：水（1：1）混合溶液。
    保留时间标准：约16～17 分钟
8．定量限
    0.01 mg/kg。
9．注意事项
1）检测方法概述
    本方法用丙酮从样品中提取恶唑菌酮，转溶到正己烷后，用硅胶小柱、酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱和十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱净化，HPLC(UV)测定、LC/MS确证。。
2）注意点
    ①要注意酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱因制造厂商不同存在性能差异。用标准品进行预先溶出试验。
    ②来自酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱的溶出液的浓缩残留物，溶解在甲醇后，加入水。如直接加入水：甲醇（1：1）混合溶液，会出现残留物凝 固在玻璃表面不溶解的情况。